4) Методи цитология

Методи цитология:

1) Пряко наблюдение на живите клетки в тялото (жизнено) или прясно изолирани тъкан (supravital).

2) Наблюдение на клетки убиват чрез фиксиране, което запазва морфологичен и химичната структура.

След фиксация, всеки материал се подлага на боядисване. Багрила - естествени и синтетични.

Синтетичен - киселина и основна. Ключови - сол боядисване бази, съдържащи амино monometilaminogruppy, имино група. Тези групи определят алкалността на багрилата. Първи в клетката, тези групи образуват сол с киселини връзка намира в структурата на клетката, което води до оцветяване. киселинни групи клетки - базофилни.

Кисели багрила - оцветяване киселина или техни соли (еозин, пикринова киселина, azocarmine и др.). Киселинни свойства дават нитро, хидроксилни, карбоксилни групи. Структурните компоненти - atsitofilnye или oxyphilous.

Широкото хистохимично или цитохимикали оцветяване, която е разделена на преки и косвени. Преките методи включват методи, които са специфични за вещество, което искате да определите. Откриване на ДНК - с реагент Шиф.

За откриване на ензимната активност се използва индиректен метод хистохимични или ензимен метод храносмилането. За тази цел, клетките се поставят в среда, съдържаща субстрат за този ензим реакция и реагенти, които се свързват конкретно към крайните продукти на реакциите.

Бряг багрило се свързва към и оцветява цитоплазма, ядрото и ядърце. Предварителна обработка на клетките на ензима РНК-аза причинява че цитоплазмата и ядрото да се боядиса малко, а ядрото няма да се промени в цвета му. Ако клетката, лекувани преди това с ДНКаза, почти напълно изчезват оцветяване основните структури.

На настоящия етап от особено значение са точни начина за определяне на модели - иму методи. Тази реакция, използвайки флуоресцентни антитела. За тази цел, протеинът, който е желателно да се определи са специфични серум. Серумът съдържа антитела, съчетани с флуоресцентни багрила. След това, маркиран протеин се въвежда в клетката.

По този начин се отвори цитоскелета.

фракциониране или метод диференциално заместване.

На първо място, чиста клетка, унищожаване на тъканите в хомогенизатор.

Получената суспензия (хомогенат) бяха подложени на висока скорост на центрофугиране. Основните компоненти (ядро, мембрана или непрекъсната структура), депозирани при ниски скорости 1-3 tys.J.

При по-високи скорости (15-30 х.) Са депозирани малък macrosomia (митохондриалната, пластид, лизозоми, нервни окончания).

Повече от 50 хил. - микрозоми. 15-20% от общото тегло. Той има сложен химически състав. EPR, вакуолата.

150-ти. - се утаява рибозоми, вируси, големи макромолекули.

Използване на разтвор на захароза се получава по-висока степен на разделяне. Разтвор плътност постепенно нараства от отгоре надолу, като образува градиент на плътност. клетъчен хомогенат се наслоява върху захароза и след това се центрофугира и клетки органели разпределени в зависимост от неговата настройка молекулно тегло на градиент, образувайки отделни ленти, които могат да бъдат изолирани и изследвани.