Serodiagnosis и последващо диагностика, безплатни курсови работи, есета и дисертации
Критерият за преценка за устойчивостта на вирулентен вирус в стадото е Xia титри на антитела в серума на кръвта на птици. Изследването е проведено само със сдвоени серуми, получени от една и съща птица. Първият образец се приема преди ваксинацията (или в началото на заболяването), а вторият - от 15-20-ти ден, а в следващия веднъж месечно. Приложни HAI, TTL, ELISA.
Диференциална диагноза. NB трябва да се разграничава от UPS, грипни, PMA-2, ILT, микоплазмоза и колибацилоза птици. За лабораторна диагностика на инфлуенца по птиците, IB и NB използването на диагностични средства biofabrichnogo производство. Диференциацията на грип A вируси, има 14 подтипове, и парамиксовирусите, включително 9 серотипове, е възможно само в лабораторни условия.
Лабораторна диагностика на класическата чума по свинете
Класическа чума ...
свинете (CSF) - силно заразно инфекциозно заболяване се характеризира с треска, заболявания на кръвта и кръвообразуващите системи, пулмонарен пневмония и пулмонарен-pseudomembrane възпаление на дебелото черво. Група А на данните за OIE.
За имуно-податливи домашни прасета от всички породи и възрасти, особено чистокръвна порода и диви свине.
Заболяването е регистрирано най-вече в Азия, Централна и Южна Америка, както и в някои части на Европа и Африка.
вируса на чума по свинете принадлежи към семейство Flaviviridae, рода Pestivirus. CSF вирусна природа, създаден през 1908 г. Schweinitz и Дорси.
Антигенни променливост на CSFV не е доказано. Вирулентност разграничи A-, B- и C -Option вирус. Група А се състои от вирулентни щамове епизоотични, причинявайки свинете от всички възрасти лошо изтичане заболяване. Подгрупа В вируси вирулентен само за прасета и докато циркулира в стадото води нетипичен или хронична язва.
PodgruppaS - американски парчета slabovirulentny. 331.
Той констатира едностранно отношенията между CSFV и едър рогат добитък диария вирус: антитела срещу вируса на едър рогат добитък диария неутрализира CSFV, но антитела срещу CSFV не неутрализират вируса диария. свинчета серум от възстановяващи се открият BHA, PA и KSA.
Диагнозата се поставя въз основа на епизоотична данни, симптомите на заболяването, както и патологични изменения на лабораторните резултати. Epizootologicheskie и патологични данни зависи от чувствителността на свине, вирулентността на щама и комплекса на мерки за предотвратяване на CSF.
Ако избухването на вирусен щам е вирулентен, броят на прасетата не са имунизирани, заболяването е силно заразно, висока смъртност, хипертермия, хеморагични кожни лезии, признаци на шок синдром, и органи на централната нервна система. Обърнете внимание изразен хеморагичен диатеза в различни органи, жилки лимфни възли, далак, инфаркти, кръвоизливи в бъбреците на фона на анемия, катарален-хеморагичен гастроентерит, лимфоцитна енцефаломиелит. Въпреки това, честото ваксинация на прасета срещу свински създава имунен фон влияе на симптомите на болестта, както и естеството на патологични изменения. По време на хронично измерима характеристика-niyami са дифтериен фокусна плака (пъпки), кафяво екзема, фибринозен перикардит и плеврит, некроза сливиците. Хронично заболяване често се случва на фона на други инфекции. Правилната диагноза може да се направи само от лабораторни изследвания.
Бързи методи за откриване на вируса на CSF. Препоръчва се за диференциация на пестивируси използване на ДНК проба за CSFV. Като хибридизационна сонда, използвайки комплементарна ДНК (32Р белязани) протеин към част от ген земно съединение P125. За бързо откриване на CSFV-D в тъканите чрез PCR от проби животинска тъкан фенолни къща изолира РНК препарати се транскрибира обратно и амплифицирани чрез PCR. Използвайте "вложени" праймери позволяват амплификация на различни CSFV изолати. PCR е с висока чувствителност и специфичност и позволява да се разграничат различни пестивируси. PCR предложен вариант за откриване на CSFV като се използва 4 праймери за амплификация на генни фрагменти на протеина
Е-1. Чувствителността на метода е 10 TCD50.
Изолиране на вируса. За изолиране на вируса, кръвни проби, парчета от далак, сливици, лимфни възли, кости гърдите, бъбреците и белите дробове от 2-3 животни по време на първите 2 часа след смъртта или клането на пациенти в състояние на атоналността. Материалът се смесва в стерилни флакони, затворени с гумени запушалки, флаконите лекувани външно с 5% р-ром хлорамин или изяснени с 20% р-ром белина, обвити с марля, напоена с дезинфектант р-набор, и се поставят в пластмасова торба. Взети patmaterial поставя в термос с лед, се запечатва и се изпраща по куриер до лабораторията с придружаващия документ. В лабораторията всяка проба се получава от суспензия на 20% .85% разтвор на р-PE NaCl, който трикратно замразява и размразява, центрофугира се при 3-4000. 20-30 мин-1 мин. Супернатантата се лекува с антибиотици 1 час при 37 ° С и се използва за изолиране на вируса.
Изолиране на вируса в клетъчна култура. Използване на непрекъснатото култивиране на РК-15 клетки, култивирани върху стъклени плочи. За всяка проба материал, като най-малко 8 тръби, в които с пипета
0.4 мл от изпитвания материал. Вирусът се адсорбира в продължение на 2 часа 137 ° С, след това се отстранява, клетките се промиват и средата се излива 2 мл поддръжка среда, съдържаща 2% телешки серум. Клетъчна култура контрол на качеството се оставя незареден 10 тръби. Инкубирайте 24-96 часа. CSFV култура в РК-15 клетки не предизвикват, следователно дисплей се осъществява чрез директно IF. След 24-96 часа след инокулирането, плочи с монослой от клетки се отстраняват от епруветките, сушат се на въздух и се фиксират на 10 минути на студено (4 ° С) ацетон, изсушава се на въздух и ги поставя върху спад на клетки с FITC-Ig CSFV прилагат към работното разреждане върху стъклени плочки. Съставите държат във влажна камера в продължение на 30 минути при 37 ° С, след това се промива в контейнер с FSB 0,01 М при рН 7,2-7,5 за 30-40 минути на тъмно, промива се с дестилирана вода, суши се на въздух и вградени в буфериран глицерол (9 части глицерин и 1 част 0.01М FSB, рН 7.5). За тази цел обезмаслено плъзгащият прилага задълбочени LU-буфериран глицерол лекарствени клетки се поставят надолу и се изсипва в стопилка край lennym парафинови зрители под флуоресцентен микроскоп.
В инфектирани лекувани препарати от Ig-FITC, AG вирус се открива от светло зелено на дифузна светлина на цитоплазмата на засегнатите клетки, подредени в групи, които се наричат флуоресцентен mikroblyashkami. След 24-48 часа в култ D-RC-15 клетки се наблюдава mikroblyashek вид. В отсъствието им в първото преминаване се провежда второ и трето преминаване на изпитвания материал последвано АКО 24-96 часа.
Дисплей и изследвания идентификация virusa.Gistologicheskie. Се извършва за откриване на специфични измерими neny-нервни тъкани. От мъртви или заклани прасета се вземат парчета от мозъчни полукълба, малък мозък, Амон, роговете на гръбначния мозък в различни области. Хистологичните препарати бяха оцветени с хематоксилин-еозин. В повечето случаи (70-93%) в ЦНС е наблюдавана об лимфоцитна несупуративен енцефаломиелит, характеризиращ се с периваскуларна лимфоцитна инфилтрация, фокална пролиферация на микроглиални клетки (глиални нодули) и дистрофия gangliozngh клетки. В филийки получени от Lim-fouzlov, сърдечния мускул и черния дроб, може да открие присъствието на ацидофилни клетки vnut-riyadernyh включвания, малко по-малки от нуклеолата. В лимфните възли те са за 6-12 дни след заразяването.
CSFV има изразен gematotropizmom отношение на костния мозък, съдържащ проводим голям брой бластни клетки в лимфните възли и далака. Следователно, костния мозък е засегната първата; инхибирани myelopoietic и еритропоетини клетки пролиферират и големи клетки с базофилна цитоплазмата. В същото време се намери снимка на дълбоки и цитолиза дистрофия лимфопойетичния органи.
Ако подозирате, че по-сериозно чума за диагностика болни животни са убити и изследват натривки от костен мозък на гръдния кош.
Биооценка. От успешното управление на инфекциозни заболявания приемате прасенца на възраст 2-3 месеца, с тегло 20-30 кг. Тъй като материалът е 10% суспензия, приготвена от органи (далак, лимфни възли, костен мозък) или кръвта от мъртвите животни. Суспензията се третира с антибиотици, се поддържа в продължение на най-малко 4 часа при 4 ° С, се центрофугира и супернатантата се използва за заразяване на животните. Три rosyatam се прилага подкожно 1 мл кръв или 2 мл суспензия органи. Две животните се ваксинират с материала за изпитване не ги съдържа отделно за контрол. Две прасе има имунизиран CSFV, се прилагат на изпитвания материал при същите дози с цел Временна диференциалната диагноза срещу ASF. За се наблюдават всички животни в продължение на 21 дни и таралеж-ден измерване на телесната температура.
Диагноза се счита за положителен, ако 2 от 3 nonimmune болни прасенца, про-проявява симптоми на болестта, и да умре, а 2 останаха здрави или имунната експонат незначителни и краткосрочни (1-4 дни), признаци на слаба интензивност на болестта (висока температура не повече от 41 ° C). Въпреки това, той трябва да се разбира, че в отсъствието на реакцията последици в възприемчиви животни или в случай на недостатъчна тежест не може да се изключи със сигурност наличието на вируса в изпитвания материал. Отрицателен резултат-ТА на инфекция може да се дължи на твърде малко количество вирус или слаба вирулентност на последните. Следователно, следващата стъпка е да се повтаря, след 3-6 седмици след инокулирането на тестов материал, инфекция (реинфекция) Морските свинчета, този път с известен вирус, известен вирулентност. Липса-Следствие животни реакция на това замърсяване показва, придобиването на имуно-тета в резултат на първата ваксинация (асимптоматична perebolevaniya) и косвено показва наличието на вирус в изпитвания материал. Едновременно с втората проба инокулира с още две възприемчиви свине (контролни) вируси, които използват-бани за повторна инфекция.
Понякога биологичната проба не е оправдано или дават неясни резултати, когато разделяне на вирусните щамове, които причиняват леко заболяване. Такива щамове са инокулирани прасета причиняват хронично заболяване. Въпросът се усложнява от факта, че вирулентни щамове със слаби не могат да имат имунизиране на имоти, но не желае да се създаде OAPC-точна диагноза с помощта на допълнително предизвикателство Виру-валентна щам (повторно заразяване). В диагностиката на заболявания, причинени от тези щамове може да се наложи млади животни, както и допълнителни пасажи за подобряване на вирулентност.
Предложени оценка мащаб на вирулентност на теренни щамове на CSFV:
- slabovirulentnye (само патогенни за сукалчета прасенца) не имунизиране щамове. Прасенца сучат на болен в първите дни на живота и смъртта на техните велики отбити прасенца (12-15 кг) реагират само в определени дни от покачването на температурата на тялото, а не придобиване на имунитет;
- slabovirulentnye (патогенни за млади животни) имунизиране щамове. Животните с тегло 15-20 кг се развива хронично заболяване, млади свине с тегло от 35 кг крушовидна ruyut повишаване на телесната температура, която продължава в продължение на няколко дни. При откриването на Откривам-жив малки червени петна от кръвоизливи. Животни придобиват имунитет;
- изключително вирулентни щамове причиняват животни с тегло 30 кг остро заболяване смъртността от 40% или повече. При аутопсията характерни промени хеморагични.
Тест модулация на фагоцитарната активност на макрофагите. Недостигът фагоцитната функция води до нарушаване на местните имунни реакции с развитието на възпалителни процеси-TION на лигавиците. Когато CSF настъпва локализация на фагоцитни функции левкоцитите в репродукцията на ваксина единици. LK-VNIVViM намален процент и фагоцитна индекс на неутрофили и макрофаги, и в размножаването на вирулентен вирус компютъра. Chi-Myn процентни увеличава и индекс на фагоцитоза на неутрофили и намалени че на макрофаги. Когато CSF ин виво и ин витро фагоцитната активност на кръвните левкоцити кратко време (до 4 дни) намалява по време на инфекция и ваксина щам повишаване на макрофаги от инфекция с вирулентен щам на CSFV. Монтирани в infitsi Rowan-прицелни клетки цитопатичен ефект изразена в фагоцитната-модулираща активност сгърчи свински макрофаг CSF използвани в диагностиката.