Микробиологична диагноза на коклюш и parakoklyusha

Материал за изследване: храчка, слуз от носа и гърлото. Материал взет със стерилен памучен тампон от носоглътката на болно дете. За вземане на материал Маленов-кал деца тампона, приготвени на тънка еластична про-Portage прилага интраназално.

Микроскопско изследване (Схема 14.2.2). метод Бактерии-микроскоп като такива за диагностика на коклюш не е приложим. За бързото откриване и определяне на Bordetella коклюш използване имунофлуоресцентен метод (вж. По-долу).

Бактериологично изследване. Основният метод Labora-Торнио диагноза на коклюш. Материал за сеитба взети чрез назофарингеален тампон или с "кашлица плочи". За да направите това, по време на кашлица отворена чашка на Петри с хранителна среда се мести в устата на бебето и задръжте за 6-8 кашлица шок. Правилното и началото на улавяне на материала дава възможност да се разпредели причинител в началния етап на заболяването, като 80-90% от пациентите. Материал AMC инокулира върху средата или кръвта - картофено кръвен агар (Bordet-Генгоу среда) и млечна кръвен агар. Хранителната среда се добавя за инхибиране на пеницилин растеж външната микрофлора. Колонии на В. pertussis в комплекта неправителствени медиите обикновено се появяват 48-72 часа kultivirova-ТА. V.parapertussis - малко по-рано: 24-72 часа Bordet-висок форма малък (диаметър около 1 mm) изпъкнала мокро лъскава колония .. В AMC Серов колонии имат цвят крем, и в среда, Bordet-Джан-покупка ще покаже chuzhny или живачен блясък. Колонии V.parapertussis повече зърнени храни Най. На Bordet-Генгоу среда и млечна кръвен агар те образуват ограничена зона хемолиза. От колонии отгледани върху плочки, приготвени намазки оцветени съгласно метода на Грам и mikroskopiruyut. В присъствието на намазки овални грам-отрицателни пръти, сложи отговор ориентиращ agglyuti нация с коклюш и parakoklyushnoy серуми. Тогава съмнителни колонии пасажирани в епруветки за продължително Sheha проучване на чисти култури.

Идентификация на избраните култури за производство на Ба-Ваня всеобхватно проучване на морфологични, kultural-ТА, биохимични и серологични свойства (виж таблица. 14.2.2). За разлика от други Bordetella В. pertussis не растат по прост агар на хранителни вещества и не променя цвета на специален фидер неправителствена медиите.

Таблица 14.2.2. Отличителни черти на Bordetella SPP.

агар (обикновен) - +

цвят
агар тирозин +

Bright кафяв цвят промяна на цветовете:

кръвен агар - потъмняване -

генерични (общо) 7 7 7

видове (специфичен и) 1 14 декември

Легенда: (+) - наличие на функция; (-) - otsutst Wie-функция; цифри показват броя на антигени.

За определяне на уреаза в аглутинация тръби правят 0.3 мл 2% разтвор на урея, 0.3 мл гъста суспензия на изпитваното културата и 2-3 капки от 0.1% -ен разтвор на фенолфталеин алкохол. В положителен случай се появява след 20-30 минути червено оцветяване показва разделяне Leniye уреаза карбамид.

Bordetella серологично идентификация, диференциация-ционни видове и определение серотипа (серотипа) ПРОВЕРКА DYT в аглутинационни реакции с адсорбирания серуми факторен. Предполага се, че антиген (фактор) 7 е родово и антигена (фактор) уникален за V.reg 1-tussis, 14 - 12 и V.parapertussis - B.bronchiseptica.

Когато бактериологична диагностика на коклюш е коларски niknut необходимо за диференциране на Bordetella отстрани с philus инфлуенца. H.influenzae често се срещат на лигавицата на дихателните пътища и причинява пневмония и други дихателни пътища възпалителни заболявания. За разлика от Bordetella H.influenzae расте само в хранителни среди кръв - кръвен агар, "шоколад" Levinthal агар с хемин-холдинг и коензим дехидрогеназа. Бактериологични изследвания продължават, някои най-малко 5 дни.

бързи диагностични методи: имунохимични, биохимични-кал и молекулно биологични изследвания. Имуно-химични изследвания. АКО метод: тампон направи две петна бяха изсушени на въздух и фиксирани към пламъка. Един флуоресцентен намазка третира protivokok-

Лушня антитела, други - parakoklyushnymi антитела. Препарати mikroskopiruyut в флуоресцентна микроскопия NE, сканиране на най-малко 50 зрително поле. Положителният резултат показва откриването на тъмно-ТА на бактериалните клетки с ясен светлинен ореол.

Биохимични и молекулярно-биологични изследвания. материал от изпитване, получени от мястото на инфекцията се използва за откриване на ДНК патоген чрез PCR. В случай, че съответната мол-прохладата може да направи предварителна диагноза.

Serodiagnosis. Аглутинация и РСК се използва главно за ретроспективен потвърждение на диагноза и диференциална диагноза на нетипични форми на коклюш в. аглутинини в кръвта на пациентите се появяват на 3-4th седмица на болестта в надписите на 1:20 или по-висока. В контекста на масово ВАК tsinatsii деца срещу коклюш диагностичен значение е увеличаването на титър на антитяло в динамиката на заболяването, така че реакционната смес се поставя отново в 4-5 дни.

• Микробиологична диагноза на дифтерия

МАТЕРИАЛ за проучване: тампони и фарингеалната лигавица на носа, с повърхността на филма и сливица, но soglotki. Материал вземат две стерилен памук Тампа контакт, единият от които се използва за получаване намазки, друг - за посев.

Микроскопско изследване (Схема 14.2.3). Намазки OK-грапавостта на метода на Грам, метиленово синьо от Leffler, от Neisser. За Corynebacterium diphtheriae характеризиращ Nali-Chie диаметрално разположени volutin зърна и местоположението на буквата "V" (вж. Фиг. 2.2.4). Corynebacterium pseudodiphth-eriae и дифте-роиди са зърно volutin или не те съдържат в краищата и по дължината на пръта. Освен това, самите бактерии са подредени в затвор. Използването на флуоресцентна микроскопия позволява да се повиши ефективността на изследванията-ТА. Така C.diphtheriae може да се разграничи от други бактерии CORINE-кафяво-червени луминисцентни volutin зърна, че те да придобият след оцветяване флуорохром-фосфин морбили. Цитоплазмата на тези бактерии дава зелена или жълта светлина. Въпреки C.diphtheriae често променят морфологични и Gia, по-специално при обновяването на гърлото с антибиотици. Настоящото инфузия време микроскопичен изпит в дифтерия на практика се използва поради ниската надеждност (висока честота на фалшиво положителни резултати и lozhnootritsatel-ционни).

Бактериологично изследване. Той е един от водещите meto-

дифтерия диагностика къща. Материал инокулира върху кръвен агар и избираеми хранителни среди, съдържащи телурит: Clauberg среда (хранителен агар с натриев телурит, гли-Cerinu и дефибринирана кръв), и т.н. В среда с телурит забавено коки растеж и други микрофлора фаринкса, че подпомага растежа на дифтерия патоген .. На telluritovoy средни форми C.diphtheriae черни колонии (фиг 14.2.1 ;. вложка) поради възстановяване на телурит (биовар гравис генерира колония сиво черно с радиални бразди повърхност наподобяваща CEE ток стайни биовар mitis - кръг изпъкнали колонии черен цвят). Типичните колонии представени Грам-наподобяват клавикули zhitelnymi пръти с характерна местоположение съдържащ зърно volutin, субкултивирани върху кръвен агар за получаване на чиста култура.

За да се потвърди диагнозата на дифтерия първо място е необходимо да се създаде специален генотоксичност култура (способността да се произвеждат дифтерия токсин). Наличието на токсина се определя от различни серологични реакции (утаяване в агар, ELISA, и т.н.). PCR метод също се използва за откриване на наличието на у-отрицателни бактерии, изолирани лисича ген контролиране на синтезата на дифтерия токсин. Доскоро конвенционалния метод на оп-определеност генотоксичност беше утаяване реакция в агар антитоксично дифтерия серум. PCR и ELISA техники, разработени в последните години е-са по-чувствителни и дават резултат в 3-5 часа.

Определяне генотоксичност реакция на утаяване: в петриево блюдо на хранителен агар, съдържащ 15-20% конски серум, 0.3% малтоза и 0.03% цистин, поставя лента от филтърна хартия, импрегнирана с анти-токсичен дифтерия серум, съдържащ 5,000 AU / мл , Блюдото се суши при 37 ° С за 30 минути и се инокулира култура изучава като инсулти, перпендикулярна на хартията в региона на 0.6-0.8 см от ръба на хартията. Като контрола известен генотоксични задънена кръг. Културите се инкубират при 37 "С до следващия ден културите на генотоксични При възпроизвеждане на връзката с текущата Sina антитоксични антитела Образуваната утайка като бели линии в плътна среда -." Whiskers "(виж фиг 10.1.7 ..).

Изолираният култура се идентифицират и да го разграничи от подобен непатогенния Corynebacteria от морфологични характеристики чески, от културални и биохимични критерии: проби за tsistinazu, уреаза, ферментационни въглехидрати-позиция, и т.н. (Таблица 14.2.3) ... В случай на разпределяне nontoxigenic култура представляват допълнителен аглутинация