Job 9

Чрез gemproteidam включва хемоглобин, миоглобин, цитохроми и ензими - каталаза и пероксидаза. Те се състоят от една част от протеина и хема, което е tetrapyrrole съединение свързан към железния атом (II).

Действието на хемоглобин концентрирана оцетна киселина в присъствието на NaCl хем влиза хемин, където тривалентно желязо и трета валенция е свързан с хлор. Под действието на алкален на хемоглобин хем постъпва хематин, където железен атом е тривалентен, а третият му валенция, свързана с хидроксилна група.

Heme принадлежи към реакцията на окисляване хемоглобин е по-бързо субстратите (S · Н2) водороден пероксид, т.е. действа като пероксидаза ензим: S · H2 + Н 2О 2 - S + 2Н2 О. Това се дължи на сходството на структурата на протезна група на хемоглобина и пероксидаза. Въпреки това, за разлика от ензима запазва каталитични свойства на хемоглобин чрез кипене и действието на силни киселини, които предизвикват протеин денатуриране.

Ако изпитваното вещество се съдържа кръв, неговото присъствие може да се открие чрез способността да катализират окисляването geminovoy групата на подходящи субстрати (бензидин, gvoyakovaya смола) водороден пероксид.

Реагенти. Водороден пероксид, 3% прясно приготвен разтвор; бензидин, прясно приготвен 5% разтвор в ледена оцетна киселина; гваяколовата смола киселина, 1% разтвор в 95% етанол, прясно приготвен; азотна киселина, конц. солна киселина не съдържа желязо, 10% разтвор; хексацианоферат (II), калиеви, 2.5% разтвор; амониев тиоцианат, 1% разтвор; натриев хидроксид, 3% разтвор; биурет реагент *; ацетон, подкислява се със солна киселина (3 мл 2 М разтвор на солна киселина в 1 литър ацетон rN≈2) се охлажда в хладилник.

Оборудване. Ленти с ширина филтърна хартия на 1 см; очно пипета; пипета 1 и капацитет от 10 мл; статив; прости и центрофужни епруветки; вода и пясъчна баня; Центрофуга центрофужни тегла; порцеланов тигел и поти клещи.

1. цяла кръв, разреден 5000 пъти с дестилирана вода.

2. Кръв дефибринирана.

3. хемоглобин кристален 1% воден разтвор.

а. тест Бензидин за хемоглобин geminovuyu група. Методът се основава на способността на хемоглобина geminovoy групи катализира реакцията на бензидин окисляване с водороден прекис в difenohinondiimin

Difenohinondiimin кондензиран с една молекула бензидин неокислена форма оцветен комплекс с синьо-зелен цвят.

Леярската тръба 1 мл от цялата кръв се разрежда в 5000 пъти, варени в продължение на няколко минути на водна баня, охлажда се и се прибавя към 2 капки бензидин и водороден пероксид. Обърнете внимание на появата на оцветяване.

б. тест Guaiac за хемоглобин geminovuyu група. Методът се основава на способността на хемоглобина geminovoy групи катализират окислението на гваяколовата от водороден пероксид озонид смола киселина своята оцветени в синьо.

Курсът на определянето. Тръбата, направени от няколко капки цяла кръв (разреден 5000 пъти) и се загрява в продължение на 1 мин на водна баня. След охлаждане, пробата се излива в алкохолен разтвор на 1-2 капки гваяколовата смола киселина и 3 капки от разтвор на водороден пероксид. Забележка оцветяване развитие.

инча Анализ с хексацианоферат (II) калиев тиоцианат и амониев желязо в хемоглобина. Методът се основава на способността на желязо включени в хемоглобина, за да се образува хексацианоферат (II) калиев в присъствието на солна киселина, синьо-зелен комплексно съединение - пруско синьо:

хексацианоферат (II) пруско

и с оцианати - тиоцианат желязо розов или червен:

Курсът на определянето. Няколко капки дефибринирана кръв се поставят в порцеланова чаша (купа) и се изпаряват до сухо на пясъчна баня. Суха минерализиран остатък се прибавя 2-3 капки от концентрирана азотна киселина и нагряването продължава (под камина). Така желязо в хемоглобина продължава пепел.

Сухият остатък се разтваря в епруветка се прибавят 10 капки солна киселина за разтваряне на пепелта. Излива се съдържа около еднакво в две епруветки. Един от тях се прибавят 2 капки разтвор хексацианоферат (II) калий. Наблюдава се появата на характеристика оцветяване. Втората тръба 2 капки излива амониев тиоцианат разтвор и бележат развитието на специфично оцветяване.

Разделяне на хемоглобина до хем и глобин. Методът се основава на способността на ацетон, подкислява се със солна киселина, за да се прекъсне връзката между хема и глобин, люспи хем разтварят в ацетон и глобиновия се утаява.

Курсът на определянето. Тръбата се изсипва 10 мл ацетон и се подкислява бавно се прибавя 10 капки разтвор хемоглобин. Проследяване на вид белезникава суспензия (глобин), който постепенно се утаява. Съдържанието на епруветките се разбърква със стъклена пръчка, се прехвърля в центрофужни епруветки и се центрофугира при 1500 об / мин в продължение на 5 минути.

След центрофугиране, горният слой (ацетон) внимателно се понижава две ленти от филтърна хартия и се прави реакция на групирането на присъствие geminovoy. За тази цел, една ивица се прилага на капки бензидин и разтвор на водороден пероксид (анализ бензидин), вторите две капки -by алкохолен разтвор гваяколовата смола киселина и разтвор на водороден пероксид (тест гваяколовата). Забележка постепенно появата на характеристика оцветяване в двете ленти от хартия.

Супернатантната течност се декантира внимателно и останалата утайка се прибавя към 1 мл от 3% разтвор на натриев хидроксид. Разбърква се съдържанието и се добавят 10 капки биурет реагент. Наблюдава се появата на характеристика оцветяване.

Осъществяване работа. Резултатите са под формата на таблица.

Резултатите показват възможността за откриване на хемоглобин в материала чрез извършва качествени реакции и разделяне на неговите компоненти, действието на киселина ацетон разтвори; подчертае значението на реакциите на практиката.

Практическото значение на работата. Основната част от gemproteidov кръв е под формата на червени кръвни клетки хемоглобин. На серум или плазма съдържа само малко количество gemproteidov, възникващи със значително разлагане на червените кръвни клетки (хемолиза). серум желязото е под формата ferrotransferina са сложни протеин (металопротеините), който транспортира желязо между тъкани и органи.

Качествени реакционни простетични групи протеиди разкриват структурните компоненти: geminovuyu част и която е част от желязо хем. За да се открият следи от кръв са много чувствителни бензидин и гваякум тестове, използвани в клинични и съдебни дела.