Изливане хистологичен материал

Вграждане на форума:

монтаж среда

За получаване на тънък (до 6 микрона) microtomy избор ходи фиксирани и се промива материал се излива в флоат-Ing среда, предварително накиснати тъканни срезове него. В над зависимост от метода на разтваряне на всички капсулиращ среда в сек-lyayut разтворим в органични разтворители и vodoras-разтворим. Първата група включва восък, пластмаса полимераза RY-базирани восък, целоидин, на втория - желатин, полиетилен гликоли, полиетери, метакрилати и т.н. Някои

1.Zalivka тъкан в парафин

Парафин - смес от високо молекулно въглехидрати ограничаване родове продукт масло дестилат; разтворен в анилин, сандък пепел, бергамот масло, целосолв, хлороформ, декалин, диоксан, бутанол, пропанол, толуол, трихлоретилен, Лола-Xi. Всяка от тези разтворители могат да бъдат използвани в ка-отличие междинно средно между алкохол и парафин. Тем-perature различни парафини топене от 27 до 62 ° С Хистологичният използваната техника парафин с точка на топене 56 ° С Външни фирми произвеждат специално парафин за хистологични изследвания, съдържащ време личен пластмасови полимери, такива като диметилсулфоксид. Техните търговски имена "Paraplast", "Paraplast плюс", "Gistoplast C", "Gistozes".

Най-бързият, най-лесният, не изисква използването на специално оборудване от материала за напълване е метод, разработен И. И. Zolotyh по патоанатомия в отдел на Института по хирургия на име. А. В. Vishnevskogo.

96% етанол 15 мин

Алкохолът 100% 15 мин

Хлороформ 15 мин

Хлороформ-парафин при 56 ° С за 15 мин

Парафин при 56 ° С с енергично разклащане за 1 минута

Парафин при 56 ° С за 45 минути

Продължителността на 2 часа и 30 минути

Пълним е както следва:

Формалин 10% на 24 часа

Изплакнете с течаща вода 1 час

алкохол 70% (дехидратация) в продължение на 4 часа

алкохол 80% повече 4 часа

алкохол 96% повече 4 часа

алкохол + хлороформ 1: 1 до 1 часа (свръх)

чист хлороформ до 1 часа

хлороформ + парафин 1: 1 до 1 37 часа

парафин 45 56С 1 m

парафин 2 56С 45 m

За приготвянето на лекарства трябва да бъде:

1 ксилен (депарафиниране) 56С 10 m

56С ксилол 2 10 m

Хематоксилин 5 m

промива се с дестилирана вода

56С ксилол по-голяма от 10 m (за осветление)

Особености изливат парафин големи обекти

Напълнете в парафин позволява да се получи хистологични секции от по-големи размери (gistotopograficheskie раздели), например, части от всички органи (матка, бъбречни) или значителна част (лоб на белия дроб). Кастинг се извършва на ръка, и е необходимо допълнително време на всички етапи за нея. За получаване на тези срезове от мозъчна тъкан с церебрална де-лай нож нарязани свежа тъкан около 1 cm дебелина и лежи в баня от фиксатор. За да се запази плосък пове-guration парче, тя се поставя между две телени мрежи, които привличат един от друг чрез гумени пръстени. продължителност Pro-фиксиране на 48 часа. След промиване с чешмяна вода (3-4 часа) трябва да бъдат дехидратирани в 70%, 96% и 100% от спиро (2) промени в продължение на 48 часа. За дехидратация може с изопропилов алкохол-menit осигуряване честа смяна и температурата е 45 ° с (в инкубатор). Това избягва прекомерно радиация в твърди лекарства. Като междинен-метилбензоат точно среда, използван или хлороформ - 3 смени в продължение на 3 дни. Обекти вградени в парафин или paraplast с точка на топене 56-58 ° С

Получаване на парафинови блокчета

Парафинови импрегнирани тъкани парчета разпространяват в рамките на SPE-циален форми и се изсипва стопяват в пещ или на водна баня при 60 ° С с парафин, който се добавя в 1 - 3% восък.

За парафинови блокове ispol'uet желана форма, образуват различно устройство. Те включват производството-mye от лаборатория хартия кутии в долната част на който изложи на парчета, и следващия да се постави странична стена етикет-ку навън номер; метал L-образна лактите или отделими форми, които са смазани преди употреба глицерол и се поставят върху нагрята метална плоча-ку, изпълнявайки ролята на дъното форми. Приложни също време личен пластмасови кутии и форми, по-специално, използвани в микробиологията, особено когато леене малки Ing сайтове, като например игла биопсия материал.

Специални машини за внос за изливане парафин (така наречените заливане центрове) са снабдени с набор от времето индивидуална форми (касети) и пинсета. Те могат да се хранят автоматично разделени дози парафин оптимална температура.

Разгъване парчета във форми и тяхната ориентация трябва да се извърши бързо топли форцепс. Ако материалът за запълване на много и тя се охлажда бързо, може да се използва двойка перка загрява на водна баня до 60 ° С За охлаждане на материал VOR препоръчваме листа се поставят във вода при 10- 18 ° С, но не се потапя в него. Когато се свива втвърдяване на повърхността на парафин блок, и се образува кратер подобни вдлъбнатина. Това трябва да се има предвид, когато леене парчета и по-нататъшна работа с блокове. Парафинът трябва да бъде 3-4 мм стърчат над повърхността на устройството, ако това ще бъде монтирана на дървен блок. Има също така голям брой единица пълнене парафин и рязане, без използването на дървени блокове, с посо-хамстер прилага дори Sannomiya микротом.

Повечето ръководства препоръчват след почистването и премахването на излишните парафинови блокчета се придържаме на дере-vyannye барове, използвайки предварително загрята на дух-агенция металилсулфонат шпатула или скалпел. След това, за да се осигури по-трайни залепване базата се топи от четирите страни на същия гореща шпатула или скалпел.

Наливане тъкан целоидин

Целоидинът - и разтваря в етер nitrokletchat-ка. Хистологичният практика с използване на 2%, 4% и 8% Ras създава целоидин, която се получава от tselloidinovyh плочи или емулсия от промива и суши лъчи филм.

За да се приготвят 500 мл 2% разтвор на 10 г сух целоидин целоидин прибавя 250 мл 100% алкохол и се оставя да престои в продължение на 1 ден, след това 250 мл безводен етер, който се разтваря в алкохол подути целоидин. За получаването на 4% и 8% разтвори се увеличава с броя на целоидин-отговорно 2 и 4 пъти. Разтворът се съхранява в плътно затворен контейнер.

Наливане тъкан целоидин става сега по-малко популярен от парафин, и тя се използва главно Obra Zoom за обработка trudnorezhuschihsya материи и предмети от болка-Shih размери, от които е трудно да се направят добри-ционните парафинови блокчета. Tselloidinovuyu попълнете се използва също и в случаите, когато това е необходимо да се избягва излагането на изследване, материалът при високи температури. В допълнение, мате-риала попълват целоидин ви позволява да получите най-добри резултати в присъствието на обекти в големите кухини, пропуските и слоеве с различна перспектива консистенция.

Етер и суха целоидин запалим, така че когато се работи с тях изисква повишено внимание.

В дехидратиран продукт се разтваря в 100% алкохол-етер (1: 1), за да 4-6ch, прехвърля се в 2% разтвор на целоидин продължение на 2-3 дни, последвано от 4% и 8% разтвори за 5-7 дни всеки. Импрегнираният парче изсипва прясно 8% и целоидин ин-lotnyayut в хлороформ пара (в ексикатор). Така полученият уплътнен материал се излива в 70% алкохол за съхранение. Изрязани блокове залепени върху плътна целоидин дере-vyannye подложки до 1 ден преди рязане.

Хлороформ 2 - 3 грама

Алкохол 70% Съхранение

Особености попълват целоидин големи обекти

Tselloidinovaya запълване, както и пълнене в парафин, разрязани произвежда gistotopograficheskie. Плаките телесна тъкан с дебелина 1 cm се поставя между две телени мрежи (както за изливане в парафин), фиксирана, промива се и се обезводнява. Общата продължителност на процеса на пълнене в големи съоръжения целоидин 2-2,5 месеца. С tselloidinovoy запълване на разположение gistotopograficheskie секции от около 20 микрона дебелина.

Попълнете целоидин-парафин

Този метод се препоръчва за обработка на предмети, които лесно се пресова при леене на восък, например хематопоеза, мезенхимни тъкани, както и на органите и тъканите, с многослойна структура (трахеята, кожа и т.н.).

Целоидин използва като смес с рициново масло (1: 1), при което предметите остават в рамките на 1-2 дни подобри гънки тяхното импрегниране. След това, за да се отстрани масло рициново материал се промива в три порции хлороформ.

Схема изливане в целоидин материал gistotopogramm от Merkulov

Попълнете целоидин-парафин

Попълнете желатин

За изследване на липидите в насипно тъкани и органи, както и изследването на ембрионални Ако обекти се използват успешно в водоразтворим биополимер запълване желатин. Използвайте прозрачен кристален желатин, която се получава от 25% и 12.5% разтвори.

Към 25 г желатин се прибавя 75 мл 1% воден разтвор на Fe-Nol (карбол вода) един и се поставя в инкубатор при 37 ° С Желатинови набъбва и форми гъсти след разбъркване в 25% разтвор. От тях при разреждане с топъл (37 ° С) вода карбол 2 пъти получени 12,5% желатинов разтвор.

Приготвеният разтвор се дозира в чист сух про-маркер за еднократна употреба и запушалка. В замразено състояние на желатина може да се съхранява в продължение на дълги периоди от време в тъмно и хладно място.

Схема за пълнене в желатинови Volkovoi-Елец

Изпълнен в желатин материал се нарязва на замръзване микротом. Получените срезове се отстраняват желатин, поради фоново оцветяване план. За тази цел секции се поставят за 30 минути в 10% разтвор на калиев хидроксид при 37 ° С След това те са про-вълни в чешмяна вода и се оцветяват. Оцветените секции включват поливинилов алкохол или глицерол тежки ване.

Получаване на поливинилов алкохол: поливинилалкохол прах се промива с 96% етанол (2 промени), етер (3 промени) и се суши. 16 г от промива прах се прибавя 100 мл дестилирана вода, се оставя да престои в продължение на 12 часа, за да набъбват. В радиация маса се нагрява в продължение на 20-30 минути в кипяща водна баня. На повърхността на гъста мътна течност Obra-zuetsya филм балон, който се отстранява и разтворът папка-ruyut през 4 слоя тензух. Поливинилов алкохол, може да се използва поканата като междинна среда за постоянни препарати след рязане на замръзване микротом. Snachev ла срязване, изправи върху стъкло, покрити поливинил алкохол, и след това, след образуване на тънък филм (6-12 часа), лекарството е приложено в полистирен или балсам.

Получаване на глицерин-желатин: 7 г желатин се прибавят 41 мл дестилирана вода и се оставя да набъбне 3-4 часа след това се прибавя 50 мл глицерин и 1 г фенол .. Сместа се загрява на парна баня, като се разбърква непрекъснато. Разтворът се филтрува през груб филтър, излива се в про-маркер, запушалка и се съхранява в хладилник.

Тъканни секции, изпълнени в желатин, получен в zamorazhi-vayuschem микротом, могат да бъдат дехидратирани в алкохоли, в освети карболфуксин-ксилен и сключват балсам или полистирол.

В други схеми препоръча друг желатин концентрация и продължителността на престоя в нея обекти.

Напълнете в водоразтворим пластмаса

За целите на хистохимия, по-специално за откриване на липиди и Fer-менти, добре доказани плат попълни Синтетични кал-разтворим пластмаси - полиетиленгликол polivaks, метил метакрилат и други.

Напълнете в полиетилен гликол с различни молекулни тегла Rinerhartu-Абул-Heyu