Алергия, диагностика ingallyatsionnaya алергия, алергичен ринит

Квалификация фагоцитарната система имунитет е основен елемент от оценката на имунния статус, който е нарушен в много възпалителни и инфекциозни заболявания. За оценка на фагоцитната имунитета системи използват редица проучване и функционална активност на неутрофилите (по-малко моноцити) кръв.

дефинират:
  1. и процентът на общия брой, морфологията на кръвните неутрофили
  2. усвояване Дейността на неутрофили поемане на латексови частици, стафилококи, кандида
    • изчислено фагоцитната номер (среден брой абсорбира частици)
    • брои индекса на фагоцитната (процентът на неутрофили ангажирани в фагоцитоза)
  3. метаболитната активност на неутрофилното възстановяване нитро син тетразолиев (NBT) до формазан
  4. хемотактична мобилност - Оценка на мобилността на хемотактична вещество
  5. лепило активност - чрез залепване към повърхностите и адхезионна молекула открива, използвайки моноклонални антитела
  6. оценка на фенотипа на неутрофили - рецептори и CD антигени
  7. определяне храносмилателната дейност (фагоцитарната убиване на).

На първо място сред тези показатели се поглъщат и разграждане на активността на неутрофили, като те директно отразяват техните анти-инфекциозни възможности. Когато се използва за оценка на неутрофилите активност изваряване бактерии трудно да се проучи тази функция. Основният метод за оценка на бактериално разграждане на неутрофили е унищожаването на левкоцити, инокулиране на хранителната среда и преброяване на колониите от бактерии. Друг метод - оценка чрез поточна цитометрия на белязани бактерии или Candida. Въпреки че последният метод е доста точен, но изисква скъпо оборудване, което не е достъпно за повечето лаборатории.

Ние сме разработили метод за оценка на активността на фагоцитната имунитет, а именно, абсорбция и храносмилателната активност на неутрофилите.

Показания

Всички видове имуннапатология. Първични и вторични имунодефицитни заболявания, алергични и автоимунни заболявания.

Имунна мониторинг на населението, живеещо в екологично неблагоприятни региони.

Контрол на имунотерапия на заболяването, имунния статус след противоракова химиотерапия и лъчетерапия.

Разработване и провеждане на предклинични и клинични изпитвания на имуномодулатори.

Списък на необходимото оборудване:

  1. Центрофугира се (1000 об / мин).
  2. Камера Goryaeva или Solar.
  3. Стъкло 10 мл центрофужни тръби (100 бр.).
  4. Термостат.
  5. Автомати 20 - 200 микролитра.
  6. Микроскоп с масло потапяне увеличение.
  7. Тема стъкло (50 бр.)
  1. Физиологичният разтвор на натриев хлорид във фосфатен буфер (PBS), рН 7.2, или разтвор на Hank.
  2. Културата на кандида албиканс. Метиленово синьо. Azur. еозин

Описание на метода за използване на технология

Получаване на кандида албиканс

Приготвя се суспензия от работен промива Candida (5.107 клетки в 1 мл). Оценка на жизнеспособността на Candida и използването само на суспензия, съдържаща не по-малко от 96% от живи кандида албиканс. Към тази суспензия се смесва 0.05 мл и 0.1 мл Candida боя (смес от равни обеми от 0.2% воден разтвор на еозин и метиленово синьо, 0.1% в дестилирана вода) след 10 минути клетки суспензия се центрофугира при 1000 об / мин 10 минута в центрофуга OPN-3, супернатантата се аспирира и утайката за получаване на намазка, суши се и се преброяват под светлинна микроскопия 200 Candida. Изчислете процентът на живеещите с лек розов цвят и неодушевено, боядисани метиленово синьо, клетките на дрождите.

Получаване на левкоцитите суспензии пациент

Оценка на усвояване активност на неутрофилите

Оценява фагоцитна индекс (PI), фагоцитната номер (FCH) и в убийството на% мъртви клетки след 30 и 60 минути инкубация. Всички проби са дубликати. Към всяка епруветка 0.1 мл плазма правят тестове пациента и се добавят 0,05 мл работа суспензия Candida. Пробите се инкубират в инкубатор на 30 и 60 минути при 37 ° С. След това клетъчната суспензия се центрофугира 5 минути при 1000 об / мин, 0.05 мл аспирирана супернатанта, пелетите се ресуспендират внимателно и се прилагат към 0.05 мл капчиците на ръба на плъзгача. След това, полиран края на втория плъзгач намазка спада на стъкло като тънка намазка, суши се, фиксира се с етанол и се оцветяват с лазур-еозин (Романовски) за 5-10 минути.

Хамбургер се изчисли на фагоцитите индекс за това при светлинна микроскопия чрез потапяне се изчисли процента на фагоцитите с Candida абсорбира.

Райт намерите на фагоцитите номер (среден брой Candida фагоцитозиртани на фагоцитарната): преброя Candida в тези фагоцити и се разделят на броя на фагоцитите. В проучването на тези показатели оценява на 200 неутрофили.

Оценка на Candida умъртвяване чрез неутрофили

До 0.05 мл клетъчна суспензия, оставащи в епруветката се прибавя 0.2 мл дестилирана вода за да се лизират кръвните клетки. След това, 0.5 мл мастило (смес от равни обеми от 0.2% воден разтвор на еозин и метиленово синьо, 0.1% в дестилирана вода), за да се оцветяват мъртви фагоцити Candida продължение на 10 минути. Освен това клетъчната суспензия се центрофугира при 1000 об / мин в продължение на 10 минути, супернатантата се аспирира и пелетата от вземане на намазка, суши се и се преброяват под светлинна микроскопия, процентът на мъртви фагоцити оцветени метиленово синьо, дрождени клетки. Живо кандида имат леко розов цвят. Оценява 200 Candida.

Изследване на два показателя фагоцитната система имунитет 30 здрави лица (донори) показа, че след 30 минути инкубиране индекс фагоцитната е 74.6 + -10,3%; фагоцитната брой - 2.7 + -0.35; Умъртвяването - 26.3 + -4.1%.

Вследствие на това нормалната система фагоцитарно индекси имунитет използване кандида албиканс са както следва:

  • фагоцитна индекс на 65-85% (74.6 + -10.3%)
  • фагоцитната брой 2,5-3,0 (2,7 + -0,35)
  • убиване на 22-30% (26,3 + -4,1).

Изучаването на тези показатели с течение на времето да се оцени степента на разрушаване на клетките абсорбират. Повишаване на фагоцитарната индекса и на фагоцитите броя с съхранява Killing показва дефицит разграждане на клетките на дрождите. Намаляването на фагоцитната индекс и фагоцитната броя след 30 минути показва, дефицит на абсорбция. Намаляването на фагоцитната индекс и фагоцитната номер 60 може да се наблюдава чрез мина при енергично лизис на клетките на дрождите.

Забележителен е фактът точност на предложения от нас метод за оценка на параметрите на фагоцитарната система имунитет. При сравняване на резултатите, получени с нашия метод (цялата кръв индекс неутрофилите фагоцитната след 30 минути инкубиране 74.6 + -10.3%) и резултатите, използвайки поточна цитометрия (фагоцитна индекс на неутрофили цели кръвни донори след 30 минутна инкубация на 75 ± 10%) [ 4] отбележи абсолютен сходство.