Определяне на съдържанието на пикочна киселина

В биологични течности по метода на Мюлер и Seifert.

Определяне на общ азот пикочния по метода на Kjeldahl.

Принцип. Методът се основава на способността за възстановяване на пикочна киселина фосфат волфрамат реагент (Фолин реактив), за да се образуват съединения, интензивността на цвета на който е пропорционален на концентрацията на тази киселина.

Прогрес. Тръбата за центрофуга е от 1,5 мл кръвен серум, вода и 20% разтвор на ТСА. С разбъркване 5 минути се центрофугират за 10 минути при скорост 3000 об / мин. Вземете две чисти завършва тръби (експериментални и стандартни) се добавя в нея реагенти в съответствие с диаграмата.

Пелети (0.5 мл серум)

Стандартен разтвор на пикочна киселина, 0.2 мг / мл

20% трихлороцетна киселина

Наситен разтвор на натриев карбонат

реагент Фолин си (внимателно!)

X = (PFU. Х 0.01 х 200) / (Est. Х 168), където Eo. - тест изчезване проба; Яде. - стандартна изчезване проба; 0.01 - тегло на пикочна киселина в проба от стандартен разтвор, необходимо за реакцията (мг); коефициент на преизчисление в 1 литър серум - 200; 168 - молекулно тегло на пикочна киселина.

Принцип. Методът се основава на способността за възстановяване на пикочна киселина фосфат волфрамат реагент (реагент на Фолин) във фосфатен волфрам синьо, интензивността на цвета на които е пропорционална на концентрацията на пикочната киселина. Брой фосфат волфрам или В се определя чрез титруване с разтвор на калиев хексацианоферат (III). Последно окисляват фосфат волфрам синьо, което цвят изчезва.

3. Определяне Целева общо урина азот по метода на Kjeldahl.

Принцип. Урината се изгаря (минерализирана) в концентрирана сулфат киселина. Така азот всички органични и неорганични съединения като амониев сулфат се свързва с киселина преминава в амониев сулфат, който реагира с реагент Nessler на съединението образува жълто-оранжев цвят. Интензитетът на цвета е пропорционален на концентрацията на разтвора на азот.

Прогрес. 1. минерализация. В епруветката се излива 0,5 мл урина се прибавя 0,05 мл конц. киселина сулфат. Изгаряне се извършва в пясъчна баня: тръбата трябва да докосва само най-горния слой от пясък. Първоначално водата се изпарява, урина придобива кафяв цвят. Тръбата се отстранява от банята, оставя се да се охлади, се добавят 2 капки perhydrol и отново постави изгаряне до безцветна течност. Трябва да се провери цвета на течността в тръбата след неговото охлаждане, като част от течността, която се появява безцветен в гореща, тъмно по време на охлаждане. След охлаждане тръба се прибавя 10 мл преварена дестилирана вода, неутрализира се с 12.5 М разтвор на натриев хидроксид до слабо алкална реакция, както е определено от лакмус промяна на цвета от червено до синьо. Излишният база в случай на неутрализиране на получения разтвор до помътняване. основа недостатъчност причинява загуба на живачни соли на Nessler реагент, и опитът се счита развали.

2. цветна реакция (nesslerizatsiya). епруветката се прибавя 0,5 мл реагент Nessler се, при което съдържанието на епруветката се боядисани в жълт цвят на различна интензивност в зависимост от съдържанието на азот. Едновременно с експерименталните проби, третирани със стандартните 0,2 мл стандартен разтвор на амониев сулфат; 0.05 мл конц. киселинен сулфат; 0,3 мл разтвор 12.5 М разтвор на натриев хидроксид; 0.5 мл реагент Nessler и 9.8 мл дестилирана вода. Експериментални и стандартни проби се измерват спрямо контрола при дължина на вълната от 440-450 пМ в 5 mm кювета. Контролът се получава по същия начин, както на стандартната проба, но вместо от стандартния разтвор на амониев сулфат се добавя вода. Контролната проба трябва да има светло жълт оттенък. По-наситен цвят контрол показва наличието на азот в дестилирана вода (амоняк). Изчислението се извършва съгласно формулата: Sup = CST # 8729; .. (PFU. / Est.), Където Соп. - общата концентрация на азот в урината (ммол / л); Април - тест изчезване проба; CST. - общата концентрация на азот в стандарта; Яде - изчезването на стандартна проба.

Клинични и диагностична стойност. В ден 10-17 грама човек произвежда азот, което представлява 80-90% от карбамид. С тази мярка се определи азотния баланс на тялото, както и функционалното състояние на черния дроб, бъбреците и други органи.

Относно: биосинтезата на нуклеинови киселини и протеини (матрица) биосинтеза. Прехвърлянето на генетичната информация. Основи на молекулярна генетика.

Значение. Един от основните постижения на съвременната биохимия и най-новите си секции се дешифриране механизмите на биосинтезата на нуклеинови киселини и протеини. Аминокиселините, разположени в полипептидна верига не е случайно, но в точно определена последователност, която осигурява уникална структура и функция. протеин механизъм биосинтеза трябва да има точна координация система, която автоматично програми включването на всеки аминокиселинен остатък в определено място на полипептидната верига. Системата за координация определя първичната структура и вторичната и третичната структура на молекулата на протеина определена първични, неговите физико-химични свойства и химична структура. Запазване на функции, изпълнение и предаване на генетична информация се извършва, нуклеинови киселини (ДНК, РНК). ДНК служи като носител на генетична информация, която може да се предава посредством лабилен от ДНК структура - РНК. Единствените материали, в които се реализира генетичната информация, са протеинови макромолекули. В процеса на прехвърляне на генетична информация определя развитието и дейността на живия организъм. функция специални клетки (черен дроб, мозък, мускули и т.н.) зависи от набор от протеини и по-специално, ензими, които контролират метаболитните процеси на клетъчно ниво.

Насочете. Подробности научат шаблон биосинтеза, за да използва тази информация за разбиране на механизмите за регулиране на генна активност в прокариоти и еукариоти, ефектът на инхибитори на матрична биосинтеза - лекарства и бактериални токсини, молекулярните механизми на генетично разнообразие на биосинтеза молекулна патология протеин, принципите на лечение и профилактика на молекулно заболяване, използването на рекомбинантен ДНК и клониране на гени в медицината.

Упражнения

1. ДНК репликация; биологично значение; полу-консервативен репликация. Откриване J. Watson и Фредерик. Крик.

2. общата схема на биосинтезата на ДНК вериги. Ензимите на ДНК репликацията в прокариоти и еукариоти: схемата за ДНК репликация.

3. Молекулни механизми на ДНК репликация: стойността на антипаралелни ДНК веригата: Okazaki фрагменти. Етапи на синтеза на ДНК молекули от деца вериги.

4. общата схема на РНК транскрипция. РНК полимераза прокариоти и еукариоти.

5. Етапи и РНК синтез ензими. транскрипционни сигнали: промотор, терминатор изходни геном част.

6. Обработка - Зреене на РНК на РНК. Антибиотици - инхибитори на транскрипцията.

7. Генетичният (биологични) код триплет структура, свойства.

8. рибозомния белтък синтез система, нейните компоненти. Структура на еукариотни рибозоми.

9. Транспортна на активиране на РНК и аминокиселина. Аминоацил-тРНК синтетаза.

10. Етапи и механизми за превод: иницииране, удължение, прекратяване. Иницииране иРНК и стоп кодони; роля на протеинови фактори рибозомите в превод.

11. пост-транслационната модификация на пептидни вериги. Регламент на излъчване. Молекулните механизми на транслацията контрол от примера на глобин биосинтеза.

12. Ефект на физиологично активни вещества процеси превод. Антибиотици - инхибитори на превод в прокариоти и еукариоти, тяхното използване в медицината.

13. регулиране на генната експресия в прокариоти. Веригата на F.Zhakobu и Zh.Mono: структурни и контролни гени: промотор, регулаторен ген.

14. Характеристика на молекулярната организация и експресия на ДНК геном на еукариоти (екзони, интрони, повтарящи се последователности).

15. генетична рекомбинация в прокариоти (трансформация, трансдукция, конюгация).

16. Биологичната значимост и механизмите на възстановяване на ДНК. Ремонт на UV-индуцирани генни мутации; ксеродерма пигментоза.

17. Генното инженерство или рекомбинантна ДНК технология: общи понятия, биомедицинска значение.

18. Технология гени трансплантация и производството на хибридни ДНК молекули. Клониране на гени за получаване на биотехнологичните лекарствени вещества (хормони, ензими, антибиотици, интерферон и т.н.).

19. Мутации: геномна, хромозомна, генетичен. Роля в създаването enzimopaty и наследствени заболявания при хора.

Тестови задачи за самоконтрол

11. Младият мъж, на 20 години, с помощта на полимеразна реакция диагностициран с ХИВ инфекция. Посочва се, че е основен в тази реакция.

А. Генетични rekombinatsiya.V. Амплификация на гени.

Г. Джийн mutatsiya.E. Хромозомни мутации.