Молекулярно-генетични методи

За откриване и идентифициране на бактерии, вируси, гъбички, и най-лесният наскоро започна да се използва широко молекулярно-генетични техники.

Реакция на ДНК и РНК хибридизация (ген сонда отговор). Нуклеотидна последователност на ДНК, или РНК е уникален за геномите на всички организми. Всяка част нуклеинова киселина може да се определи с помощта на допълнителни копия на ДНК или РНК белязани с ензим или радиомаркер (ДНК и РНК сонди). Тези проби се приготвят за най-патогенни бактерии и вируси. За тяхното идентифициране се извършва, като се използва ДНК или РНК на патогени на бактериални и вирусни инфекции в клинични проби. молекулна реакция

хибридизация е много

чувствителен и силно специфичен. Тя дава възможност за откриване на ДНК или РНК в много малки количества (1-10 PG).

Методи на генни сонди намалява реакция на тази изолирана от патологично материал патогени ДНК или РНК се денатурира и се прилага към нитроцелулозни мембрани специални.

След въвеждане на ДНК или РНК сонди се поддържа известно време, се промива многократно за отстраняване на реагенти, които не са реагирали. Ако се използва с радиоактивно белязани сонди, резултатът се определя от грам-броене. В случая, когато сондата е белязано с ензим (например, пероксидаза), сондата добавя към такъв субстрат (например, ortofenildiamin). Резултатите от ферментация субстрат в промяна на цвета, която се вижда с невъоръжено око.

Полимеразна верижна реакция (PCR) - един от най-новите методи за откриване и идентифициране на бактерии и вируси в изследваните съединения. Принципът на реакция се основава на многобройни копиране (селективна амплификация) на целева ДНК от ензим ДНК полимераза. Образуваните ДНК копия бяха идентифицирани чрез метод електрофореза.

Реакцията се извършва в три етапа. В първата фаза при температура от 95 ° С денатурация преминава dvonitkovoi ДНК молекула и неговите отклонение rozpletennya нишки.

На втория етап (ренатурация) хибридизация на праймера се случи, т.е. dvolantsyugovih образуване на праймер-шаблонни комплекси, които са необходими за започване на синтеза на ДНК. Където температурата на сместа пада до 55 ° С

В етап синтез (75 ° С) преминава удължаване комплементарни ДНК вериги, използвайки ДНК полимераза ензим. Прекарайте 15-35 синтез цикли.

Многократно повторение води до обогатяване на ДНК в изпитвания материал.

PCR е много чувствителна. Той се използва за идентифициране на инфекциозен агент, ако е известна нуклеотидната последователност на гена (или негов фрагмент), специфични само за този патоген. RLP благоприятно използван в случаите, когато бактерии или вируси са силно променливи и са изследвани материал в малки количества (дори една молекула на ДНК genomnoi).

Понастоящем PCR принадлежи към високо молекулно генетични методи, които са на разположение много лаборатории. продължителност на проучването беше 2 # 8209; 3 часа. Особено благоприятно е да се използва за откриване и идентифициране на Mycobacterium туберкулоза, сифилис, гонорея, mikoplazi, вируса на СПИН, херпес, хепатит В, ротавирус и ентеровирус.

Сума: Essential идентификация на чисти култури на

Морфологични Идентификация - да определят вида бактерии, поради техните морфологични белези.

Имайте предвид, формата и външни признаци на бактериите (коковидна, пръчки, спирохети) navnist капсулата, спори, камшичета.

Морфологично и багрилен идентификация на бактерии.

идентификация на културата - определяне на вида на бактериите заради техните културни свойства.

Имайте предвид естеството на бактериалния растеж на твърди и течни хранителни среди (характерни колонии растящи в течна среда).

Биохимични Идентификация - да определят вида бактерии, поради техните биохимични характеристики.

Като се има предвид tsukrolitichni, протеолитично, peptolitichni, редуктори и други хемолитични ензимните свойства на бактерии.

Растежа на микроорганизмите в средносрочен Olkenitskogo. 1 - неинокулирана сряда; 2 - микроорганизми разлагат глюкоза киселина; 3 - микроорганизми разлагат глюкоза или лактоза да киселина и газ; 4 - микроорганизми образуват сероводород; 5 - растежа на микроорганизми, които не се разграждат захар.

Фиг. Определяне на редуциращи свойства на бактерии.

Серологично идентификация - определяне на вида бактерии, поради тяхната антигенна структура.

За тази цел, специфичен антимикробен aglyutinuyuchi серум.