Микробиологична диагноза на гъбични инфекции микроскопско изследване

Микроскопия - това е един от основните методи в лабораторната диагностика на гъбични инфекции. За провеждане на това изследване трябва да е от деня, в средата на културата, се появи първата колония. Преди микроскопско изследване е необходимо да се знае, гъбата е мая или мухлясал - Външните колонии против резултати prorostkovoy проба.

Когато микроскопия гъбичен мицел предвид структурата (т.е., структурните характеристики на хифите, цвета си, septirovannost; структурни характеристики и конидии спори, включително размер, форма, цвят конидии; структура на тяхната клетъчна стена septirovannost т.н.)

За микроскопия подготвят местни и оцветени препарати. За получаването на оцветен материал се обработва по различни начини:

1. Метод OkraskaPAS. Използвайки метод RAS разкрива неутрални полизахариди в стените на микроорганизми. Неутрални полизахариди - глюкан-манан комплекс в клетъчната стена на най-eumitsetov поради него и е оцветена.

PAS-реакция - един от методите от микроскопични диагностициране на форми тъкан на гъбична инфекция. В практически лаборатории, различни модификации на този метод се използват за микроскопско диагноза: хромна киселина окисляване - реакция Bauer; боядисване на Gridley.

2. Покритие по метода на Грам (Грам-модификация от Weigert) за идентифициране на съответните микроорганизми.

3. Покритие съгласно Ziehl-Nilsson за откриване киселина бързо организми. Ако течност тестов материал. след получаване тях неоцветен намазка микроскопия в течности антирефлексно: смес от алкохол с глицерин в съотношение 1: 1.

Следващият етап е микоцидна изследвания - изолирането и определянето на гъбички. Помислете за характеристиките на този етап, в зависимост от материала за изпитване.

Култури. Културите изследване се основава на избор на материала на патогена. култивиране времето различен за различните видове гъби (от 2-4 дни до 4 седмици), в предполагаеми култури диморфни гъбички секретират до 8 седмици. Основната среда за култивиране на микологични лаборатории е среда Sabouraud: Sabouraud декстроза агар (твърда среда), Sabouraud бульон (течна среда). За да се подтисне растежа на бактериалната флора в сряда Saburo добавят антибиотици (хлорамфеникол, гентамицин, стрептомицин по-малко, пеницилин). Да инхибира растежа на сапрофитни гъби в сряда добавя циклохексимид, хлорамфеникол. Има готови среда с циклохексимидна (MycobioticMycosel).

оптимален режим на отглеждане за най-патогенни гъби е 30 0 ° С, 20-25 0 ° С, най-малко 37 0 ° С - подозира диморфни гъбички. инкубационно време за повечето гъбички до 6 седмици; Ако след този период не се наблюдава растеж, а след това даде отрицателен отговор. В случай на съмнение за двуобразен микози при липсата на растеж в продължение на 6 седмици, 8 седмици, културата се поддържа и едва след това са отрицателни.

диагностично значими в изучаването на културата са:

- подбор на плесен или дрожди, гъбички в изследването на нормален стерилен материал;

- избор диморфен гъбички.

Алгоритъм микоцидна изследвания

1. Определяне на гъбични патогени етиология (микроскопия).

2. Определяне гъбички или дрожди мухлясала:

- микроскопия на клинични проби (наличие на мицел);

- характер на колониите на културалната среда, скоростта на растеж (дрожди растат 48 часа гъби растат бавно).

3. окончателното определяне на гъбичката до ниво видове (вътревидови) се провежда като се използва биохимични тестове и имунологични методи. В изследването на изучаване биохимични свойства изолиран способност култура да асимилира (auksanogramma) и ферментация (zigogramma). Може би използването на автоматизирани системи за идентификация (тест-системи за идентификация на гъбички).

Критерии етиологичен изолация значение благоприятна гъбички

1. Ако в нативния получаване са само видими blastospores (сапрофитни растителност) се считат като носител.

2. Ако в нативния препарата, и има предимство blastospores pseudomycelia единични вериги, е сигнал за прехода към паразитизъм на гъбата.

3. Ако blastospores единични и pseudomycelia преобладава, това е знак за дълбоки поражения на органи.

4.Aktivnoe обещаващ blastospores - доказателства за остър процес.

5.Kolichestvennuyu резултатите от оценката - избор на гъбички разреждания

-10 -fekalii. урина;

6.Povtornost togozhe инокулация и един вид гъбички

7. Наличието на антитела към избрания щам.

Микологично проучване лигавицата освобождаване

1. Получаване на материала. След събиране на материала от лигавицата тампона се поставя в 2 мл Sabouraud течна среда или неферментирал агар или ВСН, излива се в стерилни епруветки. Те се разклаща внимателно в продължение на 5 минути, като внимавате да не се накисва тапата. От получената суспензия се получава серия от разреждания 1:10 и 1: 100 и т.н.

2. култури.

От всяко разреждане се поставят в 0.1 мл за 2 чаши жълт агар агар Saburo или IPA. Културите върху твърди носители и тръбата с течна среда с тампон за обогатяване инкубира при 37 0 ° С в продължение на 48 часа:

- след изминаването на култури сърфиране и брои броя на колониите и да определи приблизителния брой колонии мая. Техният брой се умножава по 20 и на разреждане, който е направен от посяване;

- ако за посяване на агар, направена от разреждания на липса на растеж, а след това направи втора реколта от обогатяването на средата, в една чаша на жълтия-агар.

Микологична изследване на кръв

1. Получаване на материала. След вземане на кръвна проба се разрежда 1:10 до бактерицидни свойства на кръвта не инхибира растежа на гъбички.

2. култури.

- 5-10 ml кръв се инокулира в 50-100 мл течност Sabouraud 2% глюкоза. При температура 37 0 С се инкубира в продължение на една седмица;

- 5 дни правят контролиращия засяване. За тази цел, да стерилна пипета пелети 3-4 капки от пипета посяват на жълт агар и триене стерилен бактериологично контур;

- Инокулираните плаки за 2-5 дни в термостат съхраняват при 37 0 С;

- Ако се установи растеж, а след това да даде предварително отговор на fungemia и допълнително идентифициране на гъби се извършва по време на проучването.

Микологична изследване на биопсии

1.За прием материал, използвайки метода на отпечатъци.

2. култури:

- направи отпечатък изследва парче тъкан по повърхността на гъста хранителна среда Saburo;

- В същото парче плат се поставя в 50 ml на течна среда (Sabouraud или неферментирал);

- култури се инкубират при 37 0 ° С в продължение на 5 дни.