Методи за бактериологично изследвания, лекар директория

Методи за бактериологично изследване. Изолиране на агент от кръв (кръвна култура) е метод за ранна диагностика на заболявания. Бактериемия при пациенти с тифоид-паратиф заболявания се появява в края на инкубационния период, и не изчезва по време на напрегнат период на заболяването и по време на пристъпите. Резултатите от бактериологични изследвания, до известна степен зависят от времето на превземането на материала, а броят на засетите кръв. Колкото по-рано появата на заболяване, произведен от кръвна култура, толкова по-голяма вероятността за откриване на патоген. От първата седмица на коремен кръв на пациента, взета от кубитална вена в количество от 10 мл, по-късно и по време на рецидив - 20 мл.

На първия ден от кръвта на изследването инокулира 1:10 в един от флуидни медии. Споменатото съотношение трябва да се спазва стриктно, тъй като по-малко микроби разреждане на кръвта може да умират поради своята бактерицидно действие. За посев са 10% или 20% разтвор на холинова бульон разлята 50-100 мл флакони, месо-пептон бульон, допълнен с 1% глюкоза в стерилна дестилирана вода - по метод Н. Н. Klodnitskogo в която лизис на еритроцити, техните продукти от разпада в същото време предоставят добра почва за бактерии. Също така е възможно да се използва стерилна вода от чешмата. Най-добри резултати се получават, когато посевен материал в бульон жлъчката. Ако не е възможно да се получат кръвни култури в място, заедно с серума или съсирек цитратна кръв (10 мл кръв се излива в епруветка с 2 мл 5% стерилен разтвор на натриев цитрат) се изпраща в лабораторията. кръвен съсирек в лабораторията смазан и се поставят в една от тези среди. Ампулите се поставят в инкубатор при 37 ° С

На втория ден от изследването. След 14-24 часа от началото на изследването материал посяват в блюдо на Петри върху Ендо среда или среда с еозин и метиленово синьо (Levin среда). Не се препоръчва за засаждане среда Ploskireva като намерени коремен тиф-Паратиф пръчки в кръвта, са от типа на власт задължеителен paratrofami не е незабавно да промените вида на храната върху metatrofny (т.е. мъртви органични субстрати). Ето защо, тази среда, съдържаща жлъчни соли, пръчици коремен тиф растат много слабо или не расте. При липса на бактериален растеж след първата ваксинация произвежда последващо след 48, 72 часа, а на 5-ти и 10-ия ден. Ако патогена не е било възможно да се разпределят, като се има отрицателен отговор. В случай на съмнение се препоръчва от време на време - 1 на всеки 3-4 дни - да се произвежда култури преди 24-ия ден от датата на вземане на материала. Отрицателният отговор е даден още на 7-мия ден.

На третия ден от изследването. Отглеждани на медии Ендо и Levine, "подозрителни" колонии (колонии на среда Ендо патогени безцветни) се идентифицира, за които 2-3 колония субкултивирани върху агарови наклонени и околната среда Ръсел.

На четвъртия ден от изследването. И да се вземат предвид резултатите, записани на носител, засяване на Ръсел, изучава морфологичните свойства на изолирани култури в петното, оцветени с оцветяване по Грам. Определете мобилност - наличието или отсъствието на камшичета - във висящи капка или смачкан, взети от 4-6 часа бульон култура. За тази агар култура (една линия) се инокулират в 1 мл предварително затоплен малко бульон. Избрани култура пасира (тръби 2-3), за да свистене среда с манитол, захароза и агар, и 2 тръби с месо-пептон бульон, в която тръба се поставя лента от филтърна хартия, напоена със специални решения за определяне на сероводород и индол (разгъната "пъстър номер").

На петия ден от изследването. Регистрирайте се промени в разширената "пъстър ред." В присъствието на обгазяване получаване аглутинация реакция със смес от Salmonella серуми. Ако положителна реакция се извършва аглутинация Взаимодействие с О- и N-серуми и извеждане на окончателен отговор на базата на множество от функции.

Изолиране mielokultury извършва чрез посяване на получената костен мозък точковидна 3-5 мл стерилен жлъчна говежди или в 25-30 мл 10% холева бульон, слага в термостат и на следващия ден средата за производство Ендо презасяване или Уилсън - Blair. По-късни етапи от същото изследване.

Изолиране на бактерии от изпражнения. От 8 до 10-ти ден на болестта, обикновено третата седмица при пациенти с коремен тиф, паратиф бактерии се отделят в изпражненията. За да се изследва, като последните части на стол последователността на течност, се емулгира в изотоничен разтвор на натриев хлорид (1:10) и се оставя в продължение на 30 минути преди утаяване едри частици. За засяване капка материал, взет от повърхността на течността.

На първия ден на проучване материал се инокулира на обогатяване на околната среда - бульон жлъчката, магнезиев среда, Muller, Кауфман - и се слага в инкубатор. На втория ден от изследването с обогатяване на околната среда направи култури върху чаши с медиите Ploskireva, Ендо и Ливайн и Уилсън - Блеър (бисмут сулфит агар). В следващите етапи на изследването са същите като при разпределянето на кръв култура.

Изолирането на бактерии коремен тиф-паратиф група на урината е по-добре да се получи втора третата седмица от заболяване. Преди като материалът трябва да се промива със стерилен изотоничен разтвор на натриев хлорид външен отвор на уретрата; жени е по-добре да се вземат катетър урина. За изследвания отнеме 20-30 мл урина. След центрофугиране, утайката се инокулира в средата 2 чаши Ploskireva или бисмут сулфит агара. Супернатантата се посяват върху среда за обогатяване (10% жлъчна бульон) и се поставят в термостат в продължение на 24 часа, след това се инокулират в чаша 2 избираем среда. Изолираните колонии се идентифицират по обичайния начин.

Изследване на дванадесетопръстника съдържание - жлъчката. Методът най-често се използва в етапа на възстановяване след боледуване. В жлъчката се събира по време на наблюдение в стерилни епруветки. Дванадесетопръстника съдържание инокулират във флакони с 50 мл бульон, и останалата част от материала заедно с култури се поставят в инкубатор при 37 ° С в продължение на следващия ден, правят 2 чаши посяване с твърд диференциална среда. Изолирани колонии идентифицирани, както е описано.

Висока чувствителност и обещаващ в ранна диагностика на коремен тиф и паратиф е имунофлуоресцентен метод, чрез който изследва кръв от първите дни на заболяването, изпражнения от 10-ия ден, дванадесетопръстника съдържанието на 10-ия ден на нормална телесна температура. Специфични флуоресцентен маркер коремен серуми Паратиф-бактерии, които след това се определят чрез флуоресцентна микроскопия. Методът дава възможност за диагностициране на болестта в 10-12 часа след началото на проучването.

Серологичната диагностика на коремен тиф, паратиф заболявания. От втората седмица на заболяването се появяват в кръвта на пациенти със специфични антитела, които могат да бъдат определени от Widal реакция. Когато коремен тиф и паратиф натрупват О-, и след това N-аглутини. В хода на заболяването понякога се открива и VI-аглутини, но последният, за разлика sitelstva-но нямат диагностична стойност. Определяне в кръвта на пациенти със специфични аглутини на коремен на патоген и паратиф (Widal реакция) може да съдейства за установяване на диагноза на остър период на заболяването и по време на възстановяването.

Когато салмонелоза Widal реакция е спомагателен диагностичен метод. Трябва да се помни, че необичайно форма на заболяването с слаба имунна реакция. Много често ниски титри на аглутинини, докато отсъствието им, са били докладвани при пациенти, лекувани с антибиотици.

Widal реакция отнема 1-3 мл кръв от пръст или кубитална вена в стерилна епруветка. За да се ускори съсирването го постави в инкубатор за 30 мин. Съсирена кръв обграждат стъклена пипета и се поставя в хладилник до ясно супернатанта серум. Съсирек използва за засяване (кръвна култура). Аглутинацията поставя с Н и О-коремен, А и В, паратиф diagnosticums. Серумите се разреждат, като се започне с титър от 1: 100 до 1: 800, по следната процедура. В епруветката се излива 9.9 мл стерилен изотоничен разтвор на натриев хлорид и 0.1 мл тест серум - получава разреждане 1: 100. 4 епруветките (на брой антигени, използвани в реакцията Widal) и една порция контролен серум, се дозира 5 мл разреден серум до 1 мл. От останалите 5 мл серум (разреждане 1: 100) 1 мл се излива и се прибавя към 4 мл 4 мл изотоничен разтвор на натриев хлорид до получаване на разреждане 1: 200. 4 мл от разреждане 1: 200 и се излива в 4 тръби от 1 мл, а останалите 4 мл наскоро прибавя 4 мл изотоничен разтвор на натриев хлорид до получаване на разреждане 1: 400. Следващите разреждания (1: 800, 1: 1600) произвеждат описания метод. Епруветките 4, които се контролират от антигени се излива, 1 мл изотоничен разтвор на натриев хлорид. Във всички епруветки, с изключение на тези, които са контролния серум, изсипва 1-2 капки подходящи диагностични инструменти. Триножник епруветки се разклащат и поставят в термостат при 37 ° С в продължение на 24 часа Н аглутинация (krupnohlopchataya) настъпва след 2 часа, за аглутинация (гранули) -. Значително по-късно. Интензитетът на реакцията след 24 часа празнуват диагностика титър Widal реакция при разреждане на най-малко един :. 200 в присъствието на клинични прояви.

Имайте предвид, че тази реакция може да бъде положителен в други заболявания - туберкулоза, малария, бруцелоза, злокачествени тумори и някои състояния (бременност). Видал реакция може да бъде положителна и здрави индивиди (реакция на потребителите), ваксинирани и са преминали през изминалата заболяването (анамнезна отговор). За да се увеличи специфичността на реакцията Vidal Фишер предложи разреден серум хипертоничен разтвор на натриев хлорид (2.9 и 5.8%). Това води до намаляване или елиминиране група реакции. Стойност аглутинация на реакцията се увеличава с многократни изследвания, когато динамиката на болестни установяване на повишаването на титър на антитяло. Когато паратиф реакция на Widal може да бъде отрицателна или по-малко титър на антитела, специфични групи.

През последните години, признаване на чревни заболявания широко използван реакция пасивна хемаглутинация (РНА) антигени с частични тифоид бактерии. PHA хвърли висока чувствителност и специфичност, положителното е на 5-ти ден на заболяването. Минимална диагностика титър при пациенти с коремен тиф, паратиф, салмонелоза О-антиген - 1: 200. Реакционната смес се поставя в динамиката на растеж за определяне титъра на антитялото.

Методи за лабораторна диагностика на бактерии с коремен тиф и паратиф. Бактериологично изследване на изпражнения, урина и дванадесетопръстника се извършва чрез конвенционални методи. Най-добри резултати се получават при използване на selenitovyh медии.

Във връзка с разпределението на честотата на бактерии често не е възможно да се сее патогена. По-голямата част от носители на коремен тиф пръчки откриване на микроби, съдържащи Vi-антиген, във връзка с което кръвта на остри и хронични носители показват VI-антитела (в кръвта на пациенти, те са по-малко вероятно). Диагностика реакция титър 1:20 и по-висока. Успоредно с Vi-аглутинация реакция (с затопля серум), поставен Widal реакция (роден серум) с H и О-коремен diagnosticums. В коремен серуми bacillicarriers Н антитяло титър от 1: 200 до 1: 800 се намират в 60-80% от случаите. Наличие на комбинация от Н и Vi-специфично антитяло има диагностична стойност при идентифицирането носители на коремен тиф пръчки.

На допълнителни изследователски методи за идентифициране на носители на коремен пръчки, използвани за кожата алергия тест с река Tifina и PHA с Vi-антиген.

По този начин, е важно условие за успеха на борбата срещу коремен тиф-паратиф заболявания е ранен и пълно разкриване и неутрализиране на източници на инфекция. В момента, коремен тиф се среща спорадично. Така заболяването по-малко дълъг и не се придружава от всички характерни особености на класическата форма, която затруднява клинично разпознаване.

Във връзка с по-горе комплекс лабораторното изследване става важно.