Метод преформа leykofiltrovannyh промива еритроцити

VN Мелникова, EA Селиванов, GU Kiryanov, ТА Ефтимова

Български изследователски институт по хематология и трансфузиология в София

Метод за събиране еритроцитен среда лишена от примеси максимално левкоцити, тромбоцити и плазма от leykodepletsii устройство чрез вътрешно-leykofiltr Ull-01 и последващо пране разтвор хлорид изотоничен натриев, което позволява да се увеличи неговата имунологична и инфекциозен безопасност. Възможността на средата за съхранение при 4 ° С eritrokonservante SAGM.

Ключови думи: червени кръвни клетки, leykodepletsiya, пари, морфологични и функционални свойства, безопасност.

Принцип gemokomponentnoy терапия включва използването за коригиране на различни патологични състояния кръводаряване среда максимална обелени "баласт" елементи.

В допълнение, източник на натрупване на левкоцити примес в цитокините на еритроцитите среда и протеолитични ензими, освободени от бързо дезинтегриращи бели кръвни клетки и като мембранотропна (хемолитична) действие, което значително намалява техните условия на съхранение. Наличието на еритроцитни левкоцити околната среда и тромбоцитите е в основата на формирането на microbunches.

Независимо от факта, че най-имуногенни кръвни фракции са бели кръвни клетки, в присъствието на плазмени среди еритроцитни също са далеч от безразличен към пациента. Несъвместимост между донор и реципиент плазмените протеини се появяват алергични, анафилактични и анафилактоидни усложнения. Рискова група в това отношение се състои от пациенти с дефицит на IgA. Във връзка с изложеното по-горе, за да се намали реактогенността и имуногенността на еритроцитите среди те са подложени на по- "почистване" с помощта на пари или leykofiltratsii в случаите, когато те се използват в програмите на преливане терапия при хематологични пациенти, при пациенти с бедни кръвопреливания и / или анамнеза за алергии, в детско и акушерска практика.

Въпреки това, недостатък на суспензия от еритроцити промиват дори с повтаряща прането е наличието на остатъчни донорни левкоцити (не по-малко от 30%) в отсъствието на практически значителна плазма примес и еритроцити leykofiltrovannyh - присъствието на плазма и тромбоцити до голяма степен. Само комбинацията от тези две техники позволява да се получи еритроцитите среда максимално изчиства от двете плазмени протеини, антитела, цитокини, тромбоцитите и левкоцитите, и на техни фрагменти.

Целта на това изследване е да се разработи метод за получаване и проучване на възможността за запазване на еритроцитите среда, максимално изтощени от други компоненти на кръвта. Като се има предвид резултатите от предишни наши проучвания, които да определят изпирането leykofiltra и еритроцити от плазмата, както и литературни данни, изглежда разумно при първия етап на детайла нова среда за провеждане на отстраняването на левкоцити от червените кръвни клетки (EM), а вторият - пране на червени кръвни клетки. Когато такава последователност от процедури за създаване на по-благоприятни условия за забавянето на левкоцити чрез филтруване (в присъствието на плазмата), и става възможно да се елиминира отстраняване на технология прането leykotrombosloya субект с еритроцитите слой, което намалява загубата на червени кръвни клетки

Материали и методи

EMs използва за филтриране на първия вътрешен "leykofiltr-апарат за отстраняване на левкоцити от запазената кръв и еритроцитите медиите Ull-01", произведен от АД "SPE" Interoko "(ТУ 94444-031-17121966-99). За полуфабрикат leykofiltrovannyh измива еритроцити използване на това устройство е по-подходящо от "Leykosep" нов вътрешен leykofiltra.

В съответствие с "Ръководство за устройството" в контейнера с EM получен от сборния кръв 1-2 дни съхранение (отстраняване leykotrombosloya необходимо) се прибавя 50-100 мл изотоничен разтвор на натриев хлорид и внимателно се разбърква с еритроцитен среда. Преминава през течност филтър монтаж измиване (изотоничен разтвор на натриев хлорид) на подходящ капацитет в обем от около 150 мл, се опитва да измести напълно въздух от тялото на филтъра и измиване. След това, тялото филтър се пълни еритроцитен среда, то изместване от промивния разтвор в стерилен контейнер, който след това се отстранява.

Leykofiltratsiyu извършва при скорост от 44.7 ± 7.67 мл / мин. Процедурата се прекратява изместване филтруване остатък филтрува среда от корпус и leykofiltra филтър материал (преминаване 50 мл изотоничен разтвор на натриев хлорид) в контейнер с филтрува среда. Тогава запечатан и изключен миналата.

За да се оцени съдържанието на ефективността на левкоцитите ние изследвахме технологията, описана по-горе в източника EM (камера Goryaeva) остатъчни левкоцити (а Nageotte камера) и остатъчното плазмен протеин в резултат eritrovzvesi (с използване на реагент Larionova) и загубата на еритроцити при leykofiltratsii и пране. Контролът се промива червени кръвни клетки без предварително leykofiltratsii.

Резултати и обсъждане

Предварително добавяне на изотоничен разтвор на натриев хлорид в EM, използването му за промиване на филтърния материал и да измести среда от leykofiltra остатък след филтриране несъмнено допринася за ефективността на изпиране допълнително филтрува среда от плазмените протеини. Измиване устройство изотоничен разтвор на натриев хлорид преди и след преминаване през него EM не само усложнява преформа предложен околната среда, но също така намалява загубите (поради извличане на еритроцити от корпуса на филтъра и свързващите тръби).

Резултатите от изследването на остатъчни левкоцити и плазмени протеини в експериментални и контролни серии са представени в таблица 1.

в тест (за филтрирани измити) и контрола (промива)

серия от експерименти, в деня на събирането на реколтата

0.05 ± 0.028

Рано leykodepletsiya еритроцитите медии предвижда, доколкото ни е известно, няма растеж по време на eritrovzvesi съхранение съдържание на продукти от разлагане на левкоцити и особено mieloperok-оксидаза и лактоферин (табл. 2).

(Опит) и се промива еритроцити (контролни) по време на съхранение при 4 ° С

0 0 ± 0,0 ± 0,0 5,8 ± 4,90

42,7 ± 20,85 181,5 ± 94,32 355,5 ± 39,24

0 0 ± 0,0 ± 0,0 8,0 ± 6,90

580,7 ± 414,95 1412,5 ± 1054,60 4242,5 ± 714,20

Що се отнася до съдържанието на лактоферин, че е налице значителна разлика в резултатите от различни експерименти.

За да се проучи възможността за запазване при 4 ° С leykofiltrovannyh промива еритроцити в разтвор SAGM предназначени за местни еритроцити, са предоставени 10 изследвания серия. прането Leykofiltratsiyu и червени кръвни клетки бяха проведени според "Време метод инструкция заготовки червени кръвни клетки, бели кръвни клетки, като е възможно лишени от примеси (чрез филтриране) и плазмата (от промиване)" одобрени от борда Academic RosNIIGT.

След завършване leykofiltratsii и двойно прането на еритроцитите изотоничен разтвор на натриев хлорид, след отстраняване на супернатанта, се прибавя на червени клетки в експериментална серия eritrokonservant SAGM (2: 1). Получената суспензия се съхранява при 4 ° С в продължение на 21 дни. Параметри характеризиращи морфологични и функционални свойства на суспензии на еритроцити в SAGM eritrokonservante по време на съхранение при 4 ° С са представени в таблица. 3.

Данните показват, че в края на периода на наблюдение за съхранение на еритроцитите (ден 21) на ниво ATP остава висока - над 80% от първоначалната - поради съдържание eritrokonservante SAGM аденин. Въпреки това, по време на съхранение на суспензии показва значително (повече от 5-кратно до 21-ти ден) увеличаване на концентрацията на хемоглобин и процент на хемолиза на червени кръвни клетки. Не е възможно да се препоръча съхранение на филтруват суспензии на промити червени кръвни клетки за толкова дълго време, въпреки факта, че нивото на хемолиза не е достигнало гранична стойност (в съответствие с международните стандарти - 0.8%), и да се ограничи период от една седмица, която вече е важен за активността кръв услуги институции. Организацията в дългосрочен план производство eritrokonservanta Modezhel-glyufosfat ще позволи пълно съхранение leykofiltrovannyh измива еритроцити за 21 нощувки ..

Морфологични и функционални показатели на филтруват суспензии

чрез leykofiltr Ull-01 "Interoko" и се промива еритроцити

в eritrokonservante SAGM (п = 10) по време на съхранение при 4 ° С

1,40 ± 1,21 ± 0508 0336 1,49 ± 1,80 ± 0378 0384

Суспензията на филтруват се промиват еритроцити показва оптимални средства gemokomponentnoy терапия за пациенти, които не чувствителни само с плазмените протеини, но присъствието на анти-HLA, специфичен antigranulotsitarnyh и антитромбоцитна антитяло; transfuzionnozavisimym пациенти за предотвратяване alloimmunization и остро белодробно увреждане; immunnokomprometirovannym страни да предотвратят прехвърлянето на редица вирусни инфекции; в педиатрията, включително в случай на неонатален алоимунна тромбоцитопения; пациенти с анамнеза за акушерска и гинекологични история (повтарящи се бременности, аборти); за предотвратяване на синдрома "масивен преливане" и "алогенна кръв"