Диагноза левкемия добитък - Рийд

Говеда левкемия - хронично инфекциозно заболяване, причинено от вирус на левкемия по говедата (VLKRS). Левкемия болни говеда от всички възрасти. Клинично заболяването се появява по-често при животни на възраст над 4 години.

Заболяването се първоначално асимптоматична, след разработи устойчиви лимфоцитоза или образуването на тумор като израстъци в хематопоетичното и други тъкани и органи.

Причинителят на левкемия по говедата е онкогенен РНК вирус от семейството Retroviridae.

източник патоген - животни, заразени VLKRS.

трансфер фактори са кръв, мляко и други тайни и екскретите съдържащи лимфоидни клетки, инфектирани VLKRS.

Инфекцията може да се появи и при споделяне на съдържанието на здрави и заразени животни VLKRS.

В основата на диагнозата на левкемия по говедата е серологичен метод на изследване - реакция дифузия утаяване (RDP), известен имунодифузия реакцията в агар гел (RID).

Сред положителните взаимодействие в RID животни (заразени VLKRS), използвайки метод хематологично идентифицират пациенти с левкемия.

Реакцията на имунодифузия (RID). Методът се основава на откриването на серум животински специфични утаяват антитела към антигените на левкемия вирус по говедата. Специфичните антитела се появяват в кръвта в 2-8 седмици след инфектирането и животински VLKRS съхраняват в организма през целия живот.

Вземат се кръвни проби за изследвания не по-рано от 30 дни след поставянето на ваксина и животински алергени при бременни животни - най-малко 30 дни преди отелване или 30 дни след това.

Получаването на серум. Серумите са подготвени за изследване на кръвта за изпитване върху животни в размер на 3,2 мл, и изпратени в лабораторията с придружаващия документ, който да показва номера на заглавието икономика (псевдоним), възраст, пол, порода на животното.

Кръв (серум), взети в бактериологични епруветки, инкубират 1-2 часа на топло (не по-висока от 40 ° С). За по-добро отделяне на серум обграждат съсирека ин витро proflombirovannoy след всяка проба проводник. Епруветките се инкубират в продължение на 20-24 часа при 4-10 ° С Когато невъзможност за бързо проучване, изготвено серум се съхранява в замразено състояние.

За RIM използване формулировка комплект за серологична диагностика на левкемия по говедата, който включва: химическо специфичен антиген левкемия вирус по говедата антиген специфичен разредител утаяващ серум (СПС) на агар вирус левкемия сол смес (PAS) и разредители PAS контролни серуми: отрицателен, положителен, положителен и слабо положителен с антитяло към р-24 антиген VLKRS.

Оборудване и реактиви

• блюдо на Петри с диаметър 100 мм;

• Стандартен печат перфоратор за предотвратяване на дупки в агар;

• диспенсери с връхчета за еднократна употреба;

• натриев хлорид (химически чист);

Изявление на RID. Получаване на реакционните компоненти на работата, извършена в съответствие с "инструкции за използване на кита за серологична диагностика на говежди левкемия." Антигенът се разтваря в 5 cm 3 разредител. Разтвореният антиген се съхранява при 4 ° С в продължение на две седмици.

Разредител PAS агар и сол смес се прехвърля в колба и се излива в дестилирана вода до обем 200 cm3 и след това колбата се поставя във водна баня и се поддържа до приключване на топене на агар перли. Разтопен агар гел с температура 50-70 ° С, излива се слой от 2-3 мм (12-15 мл) в обезмаслени петриеви панички и ги остави полуотворена при стайна температура в продължение на 1 час. След втвърдяване на агара специална матрица-поансон, за да отвори гел, предотвратяване на образуването на пукнатини между тях и чети от дъното на агарни плочи. Във всяка чаша се направи 5 цифри, всяка от които се състои от 7 дупки: един в центъра, до края на периферията.

Антиген, контрол и тестови серуми прибавя към ямките на всяка фигура дозатор с връхчета за еднократна употреба.

Антиген (А), въведен в централния отвор, две диаметрално противоположни отвори пълни с контролен серум (CS). Фигура 4 остава в периферните ямки (1.2, 3.4) са изпълнени с тестови серуми. Ямките са запълнени до върха, като се избягва преливане течност над ръба. След напълване всички ямки петрита бяха затворени и поставени в пещ при Т = 20 в продължение на 48 часа.

Счетоводство и оценка на резултатите на отговор. Реакцията се вземат предвид не по-рано от 48 часа и не по-късно от 96 часа.

Чаши разглеждат на тъмен фон, насочвайки фокусиран лъч на рефлектора в дъното на чашата под ъгъл от 30-45 °. Реакцията се оценява само ако е оформен агарния гел между отвор ясно утаечна линия. Ако тя отсъства или е слабо развита, реакцията трябва да се повтаря.

Специфичен утаечна линия, образувана от утаяване на контролен серум и антиген трябва да е ясно, под формата на права линия, на еднакво разстояние от ямките с антиген и тест серум.

Счита неспецифично утаечна линия се формира между ямки със серумни тестове и антигена, но не се слее с линията за контрол на утаяване, и пресича или се опира, образувайки ъгъл.

В зависимост от наличието на специфични антитела срещу антигени в тест серум VLKRS реакция оценява като положителен или отрицателен.

Да разгледаме положителна реакция, ако между ямките с антиген и тест серум утаечна лента се образува, която е свързана с утаечна лента контролен серум, образуване на непрекъсната линия, който е еднакъв с него.

• ако утаечна линия между ямки с серума тестове и антигена липсва, но контролната линия утаяване суроватка форми близо ямките с огъването на тестовата линия насочена към ямките на антигена - слабо позитивен серум;

• ако контролната линия е значително съкратено от ямките с тест серум и има дифузно огъване отвора с антигена или образува утаечна линия намира много близо до кладенеца с антигена - рязко позитивен серум.

Положително взаимодействие серум могат да образуват втора линия на утаяване, който се намира по-близо до отвора с тест серум. Тази линия показва наличието на утаяване на антитела в серума срещу втори антиген (р24) VLKRS.

При образуването на гъста, къса, без утаяване завои контрол линия не достига ямките със серум rastitrovku тестове необходимо за провеждане на този тест серум с физиологичен разтвор за получаване на резултат, който може да бъде оценена като отрицателен, положителен или неспецифично. Това изисква физиологичен разтвор в обем от 100-500 ул излива в епруветки или ямки в стандартни пластмасови плоскости за определяне серологични тестове (брой епруветки или ямки съответства на брой изисква разреждане). Първият епруветката или кладенеца с физиологичен разтвор, за да същия обем серум, смесва се и се прехвърля същото пипетиране в същия обем на следващия кладенеца или флакон, след това, след разбъркване - към следващия и т.н.

В резултат на това в първия епруветката или и по тест серум, разреден в 2 пъти, във втората - 4 пъти, в третата - 8 пъти, и т.н.

Реакцията се счита за отрицателна ако контролната линия се простира към ямките с тест серум без огъване.

В случаите, когато утаяване линия е лошо или има видимо опалесцентен зона около ямките, реакцията трябва да бъдат пренаредени.

утаечна линия контрол промяна в посоката на ямките с антигена или с контролен серум показва нарушение на антиген и антитяло съотношение в тестовата система. В този случай, трябва да се използва друга серия от диагностичен комплект.

кръв серуми животните бяха тествани позитивно в RID признае левкемия инфектирани с вируса и трябва да проучи метод хематология.

Схема за спиране и имунодифузия оценка в агар гел (RID)

1- неблагоприятно взаимодействие серум, серум реагира позитивно 2-, 3- реагира слабо позитивен серум 4- позитивен серум реагира с втора линия на утаяване, 5- рязко реагира позитивно серум 6- реагира позитивно с неспецифично серум утаечна линия, серум реагира отрицателно 7- неспецифично утаяване линия, 8- реагират отрицателно на серумния с опалесцентен зона антиген oncornavirus при говеда, KS контролен серум срещу гликопротеин антиген на nkornavirusa добитък.