свързване на комплемента (РСК)

RAC има висока чувствителност и специфичност, и се използва за:

1) серологична диагностика на инфекциозни заболявания (р Wasserman - сифилис, стр Bordet-Генгоу - хронични гонорея и т.н.) ...;.

2) идентифициране на бактерии и други. Микроби.

RGC отнася до комплекс серологични реакции, включващи други от AG и на повече хемолитична система (стр. Хемолиза) разкрива, че в резултат на реакцията.

DGC извършва на два етапа, с участието на двете системи:

1) първата система - К + при + допълни - причини допълват свързване в случай, че съответства на AT AG. В случай на несъответствия AT и AH допълнение остава безплатно;

втора система (индикатор) - gemolitecheskaya серум (хемолизин) + еритроцити - показва резултата на реакцията в първата система: в случай на положителна реакция в първата система (образуване на комплекс AH + В + допълва) във втората система не настъпи хемолиза поради отсъствието на комплемент (еритроцити заселват в долната част на тръбата). В случай на отрицателен резултат в първата система е придружена от второто хемолиза, т. К. Комплексно еритроцити хемолизини + + комплемента (вж. App. 3, Фигура 7 и 8).

1) Тест серуми (предварително топлинно инактивиран при 56 0 ° С в продължение на 30 минути);

2) антиген (направени от суспензии на убити микробни лизати микроби пълна AG, хаптени тъкан екстракти липиди);

4) Серум хемолитична;

5) 3% суспензия от овчи червени кръвни клетки;

6) физиологичен разтвор;

7) контролен серум.

Допълнете. В се съдържа в най-голямо количество, и винаги присъства, отколкото други. Животните като допълнение към RNC суши се и се използва пресен серум от морско свинче, т. К. В кръвта на морско свинче комплемент. Преди да се зареди DGC титриране трябва да се извършва в реакцията на комплемента хемолиза (овчи еритроцити, хемолитична серум допълнение, физ. Разтвор) и доза работно определение.

Тигърът на комплемента - най-високото разреждане причинява пълно допълнение което лизис на еритроцити в присъствието на серум хемолитична.

Работа доза Допълване - Допълнете номер, който е по-висок с 25% Тир.

Хемолитична получаване серум чрез имунизиране на зайци с 50% суспензия от овчи еритроцити. Полученият серум беше топлинно деактивирай при 56 0 ° С се определя титъра на обработката и дозата.

Серум титър - максимално серумно разреждане, което причинява общо лизис на еритроцити в присъствието на комплемент. работен доза поемане серум хемолитична титър в тройката.

Реакционната смес се поставя за диагностициране хронична гонорея за откриване на антитела за gonococcus.

2 Системата за КНК ръководство: основна система - серум тест, антигенът, допълни и подкрепа, индикатор или хемолитична система - Серумните хемолитични еритроцити и овце.

Ако основната система генерира антиген специфично антитяло +, адсорбирано на комплемента (свързва с този комплекс) и във втората система хемолиза се случи.

За реакция изисква:

1. серума на изпитване се получава от кръвта, взета от пункция на лакътната вена на пациента. След кръвосъсирването, серум се засмуква в отделна епруветка и инактивиран 30 минути при 56 0 ° С водна баня.

2. антиген - суспензия от убити гонококи.

3. овчи червени кръвни клетки, получени от стерилна дефибринирана кръв, взета. Те се промиват чрез центрофугиране 3 пъти с физиологичен разтвор нови порции. В реакцията се използва 3% суспензия от червените кръвни клетки.

4. Хемолитична серум получен предварително чрез имунизиране на зайци с овчи червени кръвни клетки. Преди използването на титриране на серум.

5. комплемента - прясно серум от морско свинче. От сърцето на съсирване на кръвта на морско свинче спринцовката nasasyvayut след серумът се отделя. Преди експеримента vytitrovyvaetsya доза работа допълнение. За целта се вземат основната допълнение разреждане 1:10 и се излива в епруветки, 0.1 до 0.5, след което обемът на всяка епруветка се регулира с физиологичен разтвор до 1.5 мл.

Едновременно добит хемолитична система - разрежда в тройна хемолитична титър серум + 3% суспензия от овчи еритроцити. Съставките в различни количества и се инкубират 30 минути (сенсибилизация смес), след което сместа се прибавя към 1 мл в епруветки се поставят в инкубатор за 30 минути. Контролните тръби са 3:

1. 1 ml хемолитична система + 1,5 мл физиологичен разтвор;

2. 0,5 мл допълва 01:10 + 0.5 мл еритроцитна суспензия + 1,5 мл физиологичен разтвор.

Тигърът на комплемента го нарича минималния брой, в който има повече хемолиза. За реакции вземат решения работа допълнение доза, повишен титър срещу 20-25% г. Е. Обикновено броят на комплемента, който има предпоследния витро с хемолиза. Увеличаването на дозата на комплемента необходимо, защото реакционната активност на комплемента може да бъде до известна степен потиска останалите съставки на реакцията (антиген серум).

Формулиране на основния опит на DGC Bordet - Генгоу.

Ранно бутилирана във флакони 2 и инактивиран разведена 1: 5 при тест серум. Тогава първото тръба излива антиген вторично физиологичен разтвор. След това работната доза допълнение добавя към всички тръби.

След смесване на съставките със статив тръби се поставят в инкубатор при 37 0 ° С в продължение на 30 минути (гореща свързване). В студен свързващ статив с тръби, поставени в ледник при -4 0 ° С в продължение на 18 часа. След инкубиране хемолитична система се прибавя към всички тръби. Реакционната смес се поставя в обем от 0.5 мл. Епруветките отново се поставят в инкубатор в продължение на 2 часа и след това направени резултати предварителна регистрация. Флаконите остават при стайна температура и на следващия ден показва крайния резултат.

Степента на интензивност реакция оценява в плюсове. Брутният забавяне хемолиза - четири плюсове (++++), на непълно работно време - три и един плюс. Пълен хемолиза посочено минус (-).

Той е за диагностика на сифилис антитела, за да се открие и да се определи ефективността на специфичните терапии. Тя се основава на принципа на свързване на комплемента Bordet-Джан. Съществената разлика е Wassermann реакция неспецифичен антиген: използва като антиген Lipoid екстракт от животински органи от нормалното.

За да се активира Wasserman трябва да има серум на пациента, диагностични антигени кръстосано реактивни № № 1 и 2, се допълват хемолитична серум, овчи еритроцити, физиологичен разтвор.

Diagnosticum № 1 - специфичен, treponemal.

Diagnosticum №2 - неспецифично, кардиолипин антиген, които са високо пречистен екстракт от говеждо сърце, с постоянен химичен състав на липидите. Липидите, извлечени от сърцето, химичен състав в близост до липоиди Treponema Pallidum, така че въпреки че това не е специфичен, но антитела срещу определени спирохети. Тези антигени се произвеждат централно и се използват в реакцията се разрежда съгласно титъра е посочено на етикета.

Едновременно с това, основният контрол експеримента бе 2: ясно отрицателни и положителни серуми отвори.