Рекомбинантните субединични ваксини

Напредъкът в производството на големи количества защитни антигени вирусни постигнати чрез използването на рекомбинантна ДНК технология.
Рекомбинантните субединични ваксини, приготвени от пречистени вирусни протеини, експресирани от клонирани вирусни гени. Гените, кодиращи защитни антигени са въведени в подходящ плазмид, който се клонира в експресионен система клетка. Използвани еукариотни експресионни системи включват дрожди, клетки на насекоми и клетки от различни бозайници. Предимството е възможността за отглеждане на дрожди в голям мащаб. Първият ваксината получен чрез експресия на клонирания ген в дрожди е ваксина срещу хепатит В, човешки.
Ако имуногенен вирусен протеин трябва да бъде гликозилирана форма, трябва да използвате еукариотна експресионна система. Така експресирания протеин е гликозилиран и има правилна конформация. Производство на вирусни протеини в прокариотна система е по-малко успешни [958].
Предимство на клетки на насекоми е проста технология, свързани с клетъчни култури молец (или писти), може да се получи голямо количество вирусен протеин, причинено от инфекция с бакуловирус, носещи гена (ите) на защитен протеин (и) от интерес на вируса. Промоторът на гена, кодиращ протеина на бакуловирус полихедрозен, е толкова силна, че продуктът от интерес вирусен ген, вмъкнат в бакуловирус полихедрин гена, може да бъде половината от всички гъсеници протеин или молци инфектирани клетки.

Предимството на бозайникови клетки в сравнение с клетки на ниски еукариоти е, че те са по-точни (правилно) се провежда пост-транслационна обработка, включително гликозилиране и отделяне на вирусни протеини.
Когато изберете клетка, система за изразяване на рекомбинантни вирусни антигени са важни критерии като ефективност, безопасност и технологичност. На първо място, трябва да се определи идентичността на изразено защитно антигена и икономическата приложимост на неговото производство. В случай на непрекъснати клетъчни линии, е необходимо, че експресираният вирусен протеин е лесно отделен от клетъчна ДНК, защото на онкогенен потенциал опасност. Секрецията на вирусни гликопротеини в околната среда е по-лесно да ги почисти, които не трябва да бъдат придружени от разгънати неутрализиращи епитопи. Необходимо е също така да се определи целесъобразността на прибавяне на адювант за повишаване на имуногенността на пречистения протеин.
В прокариотна система E.coli бяха изразени капсиден VP1 протеин на вируса на шап, повърхностния антиген на вируса на хепатит В, хемаглутинин на грипен вирус А, повърхностен гликопротеин G на вируса на бяс гликопротеин D на херпес симплекс вирус и протеини, кодирани от различни сегменти на генома на ротавирус [1131]. Количеството на рекомбинантен протеин VP1 на вируса на шап, синтезирано в E.coli, достига 17% от общия протеин маса. Такъв протеин в комбинация с адювант индуцира имунитет при животни [222, 1131, 1219].
Гликопротеин D на херпес симплекс вирус, експресиран в E.coli под формата negli- kozilirovannom, предизвикан неутрализиращи антитела в зайци. Това показва, че гликозилиране на вирусни повърхностни гликопротеини на вируса не е предпоставка за развитието на неутрализиращи антитела. Въпреки това, не-гликозилиран протеин на хемаглутинин на грипен вирус, синтезирано в същата система, не се произвежда в зайци и мишки, антитела, които неутрализират вируса, или забавяне на хемаглутинацията. Бяс вирусен гликопротеин получава по подобен начин и не е гликозилиран въпреки napolnorazmernost не индуцира имунитет мишки [1131].
Рекомбинантен гликопротеин Е и неструктурен протеин NS-1 японски енцефалитен вирус, синтезирано в E.coli и засилено адювант предизвиква VN-антитяло и резистентност към инфекция при мишки след четири пъти на приложение [1443]. Рекомбинантен протеин представлява С-крайната част на гликопротеина Е и N-терминалната част на NS-1 денга вирус, експресирани в E.coli, защитени мишки срещу летална хомоложна вирусна инфекция [1442]. Хранене мишки с рекомбинантен Salmonella експресиращи антигени на вируса на хепатит В, при образуване на специфични антитела с висок титър [1382]. Може би това е първата стъпка към създаването на ентерични ваксини срещу хепатит В и други вирусни заболявания.
Въпреки някои положителни резултати при използване на прокариотна експресионна система, редица проблеми, основните от които са нисък добив и агрегиране на рекомбинантния протеин [1167].