Обработка и оцветяване на костна декалцификация, оцветяване - на базата на хистология
Страница 57 от 68
Обработка и оцветяване на костната тъкан
Костни физични свойства е уникален сред тъканите на тялото. Неговото присъствие в междуклетъчното вещество на калциеви соли придава твърдост тъкан, значително усложнява получаването на хистологични препарати, обаче лечението на костна тъкан има свои собствени характеристики. Има два основни методи за хистологични препарати: 1) подготовка на парчета след специална предварителна обработка на обекта, същността на която е да разтваряне и отстраняване на костни неорганични соли (декалцификация); 2) получаване на тънки костни плаки (тънки секции) на компактни костни парчета нефиксирана чрез смилане на последната.
декалцификация
Преди да се пристъпи към декалцификация, костта като всяка тъкан, трябва да се подлага на определяне. Избор на заключване зависи от целта и естеството на изследването. По този начин, препарати за преглед и идентифициране на фибриларни компонентите на костния се използват чист формалин (15-20% разтвор), а за цитологични изследвания предпочитане сложни скоби, също съдържащи формалин, защото намалява степента на подуване на влакнести структури по време на последваща обработка тъкан (например , Shtive фиксатор: живак дихлорид наситен воден разтвор - 76 мл, формалин - 20 мл ледена оцетна киселина - 4 мл).
За определяне на мозайката да бъдат изрязани малки парчета кост (0,5-1 см), тъй като в резултат на ключалката с висока плътност прониква тъкан бавно. определяне на времето зависи от дебелината на детайла (не по-малко от 48 часа).
В края на обекта фиксиране старателно се промива в течаща вода или алкохол (например, след сложни фиксатори, съдържащи живак дихлорид), както и в следващите киселини обработка могат да образуват трудно разтворими утайки. След това, за да се проведе формулировка обезмасляване чрез серия от нарастващите концентрации на алкохоли (50, 70 и 96%) и след това се регулира до концентрация на вода чрез алкохолите връзката надолу.
Декалцифициране се постига чрез третиране на кости, с използване декалцифициран течност имащи свойства на разтваряне на неорганични соли, без да вредят на структурните елементи на костите.
Когато декалцификация трябва да се придържат към следните основни правила:
- прилага голямо количество течност декалцифициран и да го замените всеки ден (количеството течност трябва да надвишава обема на обекта най-малко 50-70 пъти);
- dekaltsiniruemy обект поставен в горния слой течност да се гарантира, че намаляването на дъното разтворими соли (висящи части на нишка или чаша сито);
- провеждане декалцификация за пълно премахване на минерални соли (но не perederzhivat материал в течности, тъй като това води до подуване и влошаване на фибрил структури оцветяване).
Декалцифициране се счита за завършена, когато обектът става мека и лесно да се реже с нож, и без криза. Производството на процеса могат да бъдат проверени от степента на потапяне в обекта на дисекционен игла. Студено запалване лекарството и да го натиснете, не се препоръчва, тъй като това ще увреди деликатните костни структури.
Декалцифициране във воден разтвор на азотна киселина (5-7.5%) е най-разпространеният метод. За да се получи работен разтвор се излива в мерителен купа 5-7.5 мл концентрирана реагент клас азотна киселина (плътност 1,40) и се разрежда до 100 мл с дестилирана вода (разтвор може да бъде получен за бъдещо използване в големи количества чрез изчисляване на общото търсене). Нанесете по-ниска и по-висока концентрация на разтвора не се препоръчва за декалцификация на костите, тъй като първата да доведе до подуване, а вторият - щетите клетъчни структури. По-високи концентрации (10%) се използват само за декалцификация на зъбите.
Изливане на желаното количество течност в подходящ стъклен съд, той е окачен на готови парче кост декалцификация. Разтворът се заменя всеки ден до пълното премахване на варовика. време декалцификация зависи от свойствата на обекта (стойност плътност) и концентрация на азотна киселина. Средната продължителност на декалцификация малки парчета кортикална кост 10-12 дни.
След завършване на отстраняване на котления камък да се елиминира подуване влакнести структури лекарство суспендира в продължение на 24 часа в 5% разтвор на натриев сулфат или литий (в отсъствието на такива соли кост трябва да се постави в алкохол 96%) и едва след това внимателно се промива за 1-2sut в течаща вода ,
Може да се съкрати получи декалциниран кост, поставяне на парче дребен директно в 5% разтвор на трихлороцетна киселина, съдържаща 10-20% формалдехид. Тази смес едновременно улавя и декалцифициран. Малко парче средна плътност може decalcify в продължение на 3-5 дни. След декалцификация промива в алкохол (в никакъв случай не във водата!).
Има и редица други начини за премахване на варовика, но всички те са базирани на същия принцип, да изискват спазването на общите правила, посочени по-горе.
След декалцификация на костната тъкан могат да бъдат нарязани на замръзване микротом и се излива в целоидин или целоидин-парафин по обичайния начин. Попълнете восъкът не се препоръчва, тъй като това е лошо прониква калцият се отнема кост.
В момента местната индустрия започва да произвежда специален тип шейна микротом което позволява да се намали костта без предварително премахване на варовика, при което се получава раздели 20-50 микрона дебели.
оцветяване
Най-често срещаният метод за оцветяване секции декалциниран кост - в SHmorlja (tioninpikrinovaya киселина). Работни разтвори: А - наситен разтвор на thionine в 50% алкохол, В- 1% воден разтвор на фенол Б - наситен разтвор на пикринова киселина.
Преди употреба, изпразнената 1 част разтвор с 10 части разтвор В в секциите на вода се прехвърля за 10 минути към получената смес, и след това се изплакват с дестилирана вода и се поставя в 30-60 с наситен разтвор на пикринова киселина. След това секциите се промиват отново в дестилирана вода и се диференцират в 70 ° етанол, за да се получи тъмно червен цвят. След това те се прехвърлят към 96 ° алкохол, който продължава диференциация (под контрола на микроскоп), докато общия контекст на разреза няма да се korichnevyy4 (или блато) цвят и костни клетки и техните процеси - в червено. след това оцветени секции са извършени при 96% и абсолютен алкохол, карболфуксин-толуен, толуен и вградени в балсам.
Ако дялът се оцветява слабо поради продължително декалцификация в азотна киселина, първо трябва да се постави амонячна вода, а след това и се промива с дестилирана вода и след това се оцветява в продължение на 2-3 часа в 0.5%.