Обяснението на учителя

Методологията на проучванията и насоки по темата.

Тема 16. титруването на вируси

Задача към следващия урок.

Обобщавайки сесията.

За да се определи наличието на антитела в серума на заек кръв към вируса на нюкасълската болест.

Самостоятелна работа: а) в залива на агар пързалки; б) получаване на дупки в слой от агар; в) преливане RDP компоненти; г) мокро предавка камера; г) Скица DSA схема в преносими компютри; д) данни за резултатите от ПРСР и ПРСР влезе в схемата на следващия ден или на следващия урок.

1. Какъв е принципът на ПРСР?

2. Какви проблеми може да реши ПРСР?

3. Какви са предимствата и недостатъците на ПРСР?

Целта на класа: въвеждането на метода на титриране на вируси

Оборудване и материали: задачата за определяне на вирусния титър на в ED50 на основата на действителните данни, изготвени на карти (за всеки ученик по една карта, всички най-малко 10 варианта на задачите); алантоиден разтвор на пилешки ембриони, заразени с нюкасълска болест; 1% суспензия на промит кокоши червени кръвни клетки; физиологичен разтвор (изотоничен разтвор на натриев хлорид); Плексиглас дупка панел; мерителна пипета 1 мл; каучук круша; изпълнен с дезинфекционен разтвор; моливи за писане върху стъкло, калкулатори, логаритмични таблици, мултимедийна техника, презентации, MS Office Power Point по темата за заетостта.

лабораторните упражнения с производство вируси biofabrichnom и ветеринарна практика често се налага да се определи количеството на вируса в даден материал. Без такова определение е невъзможно експериментално заразени с вируси, живеещи лабораторни системи, производството на живи и инактивирани вирусни ваксини и диагностични продукти, оценка на дейността на живи вирусни ваксини, получаване на имунни серуми и много други работи.

Количеството на вируса във всеки материал се определя от вирусния титър в този материал. При вирусния титър разбере изражението му на концентрация в материала.

Титърът на вируса - това е количеството на вируса, съдържаща се в обема на единица материал. Тъй като количеството на вируса не може да се изрази в обикновено се използва (обем, тегло и др. Н.) единици място за измерване в единици действие или дейност единици. И инфекциозни вируси имат нахемаглутиниращия дейност. Следователно, устройството на размера на вирусни инфекции и хемаглутиниращ.

Размерът на тези единици zivisit пълен и съотношението на дефектните вириони в метод, използван суспензия обект титруване, и други фактори. На практика, тя е била използвана три вида на броя на дяловете на вируса: първо - инфекциозни единици на местно щети, причинени от вируси и оценени над един единствен ефект; Второ - инфекциозни единици на 50% от вирусите в чувствителните живи обекти оценяват статистически; Третото - хемаглутиниращ единици.

От местната развала, причинена от вируси, най-известните плаки в заразени клетъчни култури (островчета в слой от мъртви клетки живи) и pockmarks (некротични нодули) на кокоши ембриони Хао заразени и някои други вируси на едра шарка. В случай на такива прояви на инфекциозна активност на количеството на вируса на вируса може да бъде измерена в плака-образуващи единици (PFU) или ospoobrazuyuschih единици (ooe). Един PFU е доза от вирус, който може да доведе до образуването на плака и един ooe - един pockmarks.

Най-гъвкав метод за определяне на вирусния титър в единици от 50% инфекциозна действие. Съгласно този метод, за единица количество вирус се приемат като доза, която е в състояние да причинят инфекциозния ефект в 50% от инокулираните тестови обекти. Той е определен като ED50 - 50% ефективна доза. Броят на дозите на вируса за единица обем на материала и ще експресират вирусния титър в материала.

Видове вируси единици, както е определено чрез действие с 50% инфекция

Видове вируси инфекция

Като тестови обекти в лаборатории обикновено използват бели мишки, пилешки ембриони и клетъчни култури, в които действието инфекциозен вирус може да се прояви смърт, клинични симптоми и изменения pathoanatomical цитопатичен ефект. За всеки вирус, избран чувствителност към изпитвания обект и запис форма инфекциозен действие, с което се оценява ефекта на инфекцията. В зависимост от вида на тест обект и форми инфекциозен действие ED50 има една от следните видове, показани в Таблица 6.

1 е LD50 доза на вируса, която убива 50% от лабораторни животни (обикновено бели мишки);

ID50 -Dose един вирус, който предизвиква клинични симптоми или патологични промени в 50% от заразените лабораторни животни;

ELD 1 - доза от вирус, който убива 50% от кокоши ембриони;

1 -Dose EID50 вирус причинява патологични промени в 50% от заразените ембриони нахут;

TSPD50 1 - доза на вируса, който причинява цитопатичен ефект в 50% от инфектираните клетъчни култури (обикновено тръби с клетъчни култури).

Брой ED50 (LD50. ID ELD50. EID50 или TSPD50) вирус, съдържаща се в единица обем от вирус-съдържащ материал, и ще бъде израз титър (Т) на вируса в този материал. Например, Т = 10 3.48 TSPD50 / 0.1 мл означава, че всеки 0.1 мл вирус-съдържащ материал се съдържа 10 3 48-дози на вируса (т. Е. Повече от 1000, но по-малко от 10 000, а именно 10 3 48 = 3020), всеки от които е в състояние да индуцира цитопатичен ефект в 50% от епруветки с културата на клетки.

Споменатите единици 50% от вирусната инфекция (LD50. ID50. ELD50. EID50. TSPD50) се използват в случаи на инфекциозни оценка на вируса с статистическа оценка на ефекта се извършва, когато се отглеждат инфекция на вируса се извършва от летален ефект, клинични симптоми, патологични промени или цитопатичен ефект.

Титруване на вируса чрез действие с 50% инфекция - най-универсалната техника е подходяща за почти всеки титруване на вируса, ако вдигнете чувствителни към него на живо система (текст обект). Въпреки това, този метод титруване на вируса е доста времеемко и изисква дълъг статистически изчисления.

Проблемът за определяне на вирусния титър в единици от 50% инфекциозна действие (LD50. ID50. ELD50. EID50. TSPD50) се свежда до това да се намери разреждане на материала за изпитване вирус-съдържаща в размер на инфекциозна доза, която ще съдържа един ED50. и след това да се изчисли колко единици от вирус, които се съдържат в един и същ обем, съдържащ вируси материал, който е индикатор за вирусен титър в този материал.

За да се реши този проблем, първо на изследвано вирус-съдържащ материал се получава чрез серия от последователно разреждане 10 пъти. 10-кратни разреждания на заплащане, по две причини:

Първо, както се вижда от графика на ефекта на инфекциозни дози от вирус (фиг. 35), кривата на зависимостта близо до точката, съответстваща на ED50. най-значителен интервал подходи права линия.

Фигура 35. графика на ефекта на инфекциозна доза на вируса

Това означава, че в определени граници, в центъра на който е ED50. между логаритъма на дозата (разреждане) на вируса и инфекциозен ефект съществува праволинейни връзка, т.е., количеството на инфекциозен ефект е пропорционално на логаритъма на дозата на вирус (или разреждане) в ниските и особено високи дози от тази зависимост е счупен ..;

от друга страна, при 10-кратно разреждане улеснява следващите изчисления.

Равни обеми от всеки от 10-кратни разреждания от теста инокулират с вирус, съдържащ материал равни групи податливи на този вирус живо тестови обекти (мишки, пилешки ембриони или клетъчни култури). По този начин във всяка група трябва да бъде най-малко 4-6 тестови обекти, тъй като по-малко статистически изчислена стойност на вирусния титър ще има твърде много грешки (статистическа стойност по-точен от по-голям размер на първоначалния данни са базирани).

След инфекция, сметка вирус за резултат от действието (смърт, клинични симптоми, или патологични промени СРЕ) в инфектираните обекти и определи кои разреждане на вируса се оказа ефективна от 50% от чувствителни обекти. Разреждане дава 50% ефект се изчислява чрез интерполация на праволинейни. Когато намерено такова разреждане, се счита, че обем от заразяване вирус, разрежда намерено (съответстващо на 50% ефект) няколко пъти, съдържа 1 ED50. В същия източник екран (неразредени) вирус, съдържащ материал, като дози (ED50) съдържа още толкова пъти, колкото нещата се разрежда, 1 даде ED50. След това се превръща, като единици 50% инфекция на вируса се съдържат в единица обем (мл) вирус, съдържащ материал, който ще бъде израз на вирусния титър в материала.