Моноклоналните антитела в диагностиката и терапията
1 моноклонални антитела в диагностиката и терапията Olovnikov NI Хематология Research Center, LLC "Хематолог" София
2 TSOLIPK Colyclons Colyclons ВЪТРЕШНО моноклонални антитела към еритроцитни антигени първия получени при TsOLIPKe (сега хематология Research Center)
3 Предимства на моноклонални реактиви: неограничен брой отхвърляне на донор имунизация специфичност стандартизация в състояние да прилага прости тестове на стабилността на дълъг срок на годност
ако ($ това-> show_pages_images $ PAGE_NUM док [ 'images_node_id'])
4 Определяне на кръводарители и създаването на фенотип фенотипизирано кръвна банка се извършва с цел: 1. Изборът на съвместим кръвопреливане, особено за получателите имунни антитела; 2. Търсене на редки антиеритроцитни фенотипа и създаването на комисия, която да определи спецификата на имунни антитела. Определяне на кръвни получатели прекарват фенотип: 1. пациенти с имунни антитела; 2. Пациенти с анамнеза за преливане са несъвместими; 3. Пациенти, които изискват многократни хемотрансфузии; 4. бременни жени и жени в детеродна възраст.
5 immunoserological ИЗСЛЕДВАНЕ НА КРЪВ (фенотипизиране) АВО Rh Kell АНТИ - D - C - C W - в - Е - д АНТИ - AB - AB - А1 АНТИ - К - к
6 МАСА и систематични ПРОСТА фенотипна Rovani кръв стана възможно с появата на моноклонални реактиви като не ограничаване на броя на реагенти може да се извърши едновременно определяне на всички антигени могат да бъдат избрани от един подходящ метод за изпитване
7 тенденции на моноклонално диагностичен реагент 1. Създаване на различни сложни системи за изпитване, автоматизация
8 тенденции на моноклонално диагностичен реагент 2. Създаване олигоклонални реагенти вместо моноклонално. Eritrotest-Colyclons анти-а: Смес от две моноклонални антитела, проявяващи различна активност спрямо нормални и слаби варианти на антиген Eritrotest-Colyclons анти-С, анти-С, анти-Е е също смес от два ICA. Eritrotest-Colyclons анти-D (за тестване кръвни донори): смес от клас IgG с четири ICA, насочени към различни епитопи на антигена D. Eritrotest-Colyclons анти-г супер един ICA клас IgM.
9 ИЗПИТВАНЕ НА ПРОБЛЕМА D ф D слабо (D слабо) намалена експресия на антиген не е модифициран D частично (D частично) експресия на различни варианти са различни, не е серия от модифицирани епитопи епитопи като тип D VI 1) D VI Червените кръвни клетки могат да стимулират имунен отговор (); 2) Ако анти-г антитела в организма на реципиента на реакция след преливане тя е неизбежна, еритроцити D VI () Донори D VI - Rh-положителни положителни получатели D VI, бременни жени D VI Rh-отрицателни отрицателен, защото могат да развият антитела срещу района детерминанти трансфузия D-положителни еритроцитите.
10 РАЗЛИЧНИ моноклонални антитела, използвани в ТЕРАПИЯ п L Fab Fc CDR на тежката верига Н; L леки вериги; Fab Fab-фрагменти; Fc Fc-фрагменти; CDR комплементарни области (CDRs).
Структура 11 IgG молекули антиген-свързваща част на променливата част (V) константната част (Fc)
12 Антитяло-зависима цитотоксичност механизъм първичен имунен унищожаването на прицелни клетки чрез действието на FcgammaR ICA антиген антитела антитела се свързват към антиген на повърхността на клетка мишена. NK лимфоцити признава ICA чрез Fcgamma рецептори. Активирани NK лимфоцити хвърля perforines и протеази, които разрушават клетката мишена.
Хемолитична болест на плода 13 (новороденото) доведе имунологичен плода конфликт и майка, резус несъвместима RhD антиген след първото раждане D + фетални червени кръвни клетки, кръвта в капана на Rh-отрицателни майката причини й анти-г отговор. Имунната анти-D антитела принадлежат към класа IgG имуноглобулини, I бременност Rh Rh + - което следващата бременност премине през плацентата и да причини разрушаване D + фетални еритроцити, II бременността води до хемолитична болест.
14 Прилагането на анти-Rh имуноглобулин след раждането предотвратява rezusimmunizatsiyu жени, т.е. Тя причинява антиген-специфична имуносупресия I II бременност Бременност
15 Ефекти че причинява анти-Rh имуноглобулин въведена след раждане: D + фетални червени кръвни клетки бързо (в рамките на един ден) изчезват от майката циркулация, ако лекарството се прилага в достатъчно количество (20 мкг / 1 мл RBC) унищожаване на еритроцитите става без участието на комплементната система, т.е. например гости-. не се наблюдава интраваскуларна хемолиза Екскрецията еритроцити се среща в далака, с участието на макрофаги, носещи рецептори за Fc фрагменти на антитела анти-Rh имуноглобулин причинява временна поносимост към D + червени кръвни клетки и предотвратява анти-г анти-Rh антитела имуноглобулин не е ефективна, ако вече е настъпило сенсибилизация, дори когато нисък титър имунни антитела
16 Способността на антителата силно се свързва към антиген D и бързо изход D + червени кръвни клетки от кръвообращението не е предвидено профилактика на анти-Rh имунизация срещу г имот моноклонално антитяло анти-г IG анти-г специфично свързване с D антиген на еритроцити + унищожение D + ин витро червени кръвни клетки в реакцията антитяло-зависима цитотоксичност клирънс Ускорение + D + червени кръвни клетки от кръвния поток чрез далака + + Продължителното циркулация в кръвта, съответно план живот IgG + + Инхибиране на имунен отговор към антиген D - +
17 Имунен отговор към еритроцити, сензибилизирани с анти-D антитела Активирането на активиране на комплемента система / подтискане на имунокомпетентни клетки, носещи на Fey - рецептори
18 Три вида активиращи рецептори и един вид инхибиторен рецептор, експресиран на имунокомпетентни клетки. Различни видове рецептори медиират отговор в различни видове взаимодействие с Fc частта на IgG молекула. Активиране рецептори: FcyRI,, с FcyRIIA, FcyRIII, Инхибиращият рецептор: с FcyRIIB NK-макрофаг лимфоцити В-лимфоцит FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB, FcyRIII, IgG рецептор IG AH еритроцити (D) активиране на потискане на активиране
19 Реакционна схема антитяло-зависима цитотоксичност (ALT) моноцит NK а) б) ER анти-г FcyRI, FcyRIIA, FcyRIII, в) хемоглобина в реакционната унищожаване ALT г + Er от два вида ефекторни клетки, носещи на FcyR моноцити с FcyRI, и с FcyRIIA, NK лимфоцити с FcyRIII, ,
20 Ефикасност на хемолиза медиирана FcyRI, и FcyRIII, в моно- и поликлонално анти-г антитяло е коренно различна лизис% otanti - D IG G-7 G-12, G-17, G-48, анти-г IG на Fey (I + III) FcγIII анти г моноклонално антитяло, които взаимодействат само с FcyRI,, но не и с FcyRIII,, нямат имуносупресивен ефект.
21 Използване на избора на анти-г реакция MCA ALT оставя да се намери ICA медииране лизис чрез FcyRIII,. ICA с този имот са много редки: там са около 1% от общия брой на получените. G-112 G-108 анти-D, 100 нг / мл
22 поликлонален антисерум съдържа смес от антитела с различни свойства различни клонинги на плазмени клетки секретират различни антитела поликлонален серум
23 Схемата за получаване на клетъчни линии, секретиращи човешки моноклонални антитела в клетъчни В-клетъчни линии
24 Структурните и функционалните характеристики на анти-г МСА МСА лека верига подклас Liniyaprodutsent активност Секвениране Fc ALT (% на antirezus IG) G-108 κ IgG1 LBL 101 IGHG1 * 03 YY 53 N / A G-112 κ IgG1 LBL 78 IGHG1 * 03 HS 35 N / 12 G-κ IgG1 LBL IGHG1 * 19 03 HS 26 03 IGHG1 * LBL човешка лимфобластоидна линия; ДВ heterohybridoma човек-мишка IGHG1 * 03 - пен IgG 1; N / не г направено
25 така функционално различни антитела имат идентична аминокиселинна последователност. Това означава, че различията определят пост-транслационни модификации на имуноглобулиновата молекула. гликозилиране
26 Структура на олигозахарид прикрепен към Asn 297 от тежката верига на IgG човешки VH СН1 СН2 СН3 Cialovaya-та (NeuAc) Asn 297 галактоза маноза N-ацетилглюкозамин фукоза полет захар стрелка може да се пропусне, което дава около 30 варианти (гликоформи) се намират в нормално човешки IgG
27 Човешки клетки, секретиращи моноклонално антитяло, могат да бъдат кондензирани с други клетъчни видове и са heterohybridoma секретиращи човешки моноклонални антитела. Аминокиселинната последователност на МКС след сливането не се променя, но структурата на захар в хибридните клетки ще се формира с участието на ензими миеломни клетки. Миши миеломни P3-X63-Ag8.653 човешки / миши В-лимфобластоидна човешки клетки на плъх миелом YB2 / 0 клетки човешки клетки / плъх при гризачи ICA гликозилирани различно отколкото в човешки клетки.
28 Ефектът на линия производител на ефективността на хемолиза, медиирано от FcyRIII,: миша миеломна намалява и увеличава афинитета на плъх анти-D на IgG1 моноклонално антитяло към FcyRIII ICA ICA G-108 3F8 IgG1 анти-г IG хора ICA G-12 анти-г IG хора
29 Заключение: успех при вземането на моноклонално анти-г на лекарството за предотвратяване на хемолитично заболяване на новороденото зависи не само от свойствата на МКС, но също и от клетъчни системи за производство на антитела
31 Работата по изследването на функционалните свойства на моноклонални анти-г препарати, направени в кръвообразуването хематология изследователски център физиология лаборатория с участие на служители на Министерството на подготовка на кръв хематология изследователски център, болница дневен престой хематология Research Center, кръвна банка DZ на Москва, подкрепена от RFBR и OOO "хематолог"
32 Възможна имунна реакция на въвеждането на различно гликозилирани анти-г ICA човешки моноклонални антитела с "други" захарни рецептори вродената имунна система възпалителния отговор представянето AH Синтез ICA антитела с "тяхната" захар, способни да реагират с взаимодействието FcyRIII, с FcyRIIB, по B Взаимодействие на клетки с на FcyR на макрофаги, далак инактивиране на антиген-специфични в-клетъчни клонове, не синтез фагоцитоза антитела невъзпалителен клирънс път А, не синтез антитяло