Микроскопско изследване, метод микроскопско изследване

За микроскопско изследване инсулти се суши на въздух, фиксирани и след това се оцветяват.

Материалът на тест се разпределя тънък слой върху повърхността на обективната обезмаслена добро стъклото. Вагинално течение, приложена към предметно стъкло по-близо до ръба на тесните, покрити с друг слайд. Стъкло леко натиснете надолу до друг.

След това, свободните краища на очила I и II захващане пръстите на двете ръце и се разрежда в противоположни посоки, така че, когато се движат в две стъклото са долепени един до друг. По този начин, намазки се получават с равномерно разпределени материал.

Изсушаването и определяне на намазки
Приготвеният намазка върху предметно стъкло и се суши на въздуха, след сушене е фиксиран. При определяне на тампона прикрепен към повърхността на плъзгача, а следователно и последващо оцветяване на препарата, микробните клетки не се отмиват. В допълнение, мъртвите микробните клетки се оцветяват по-добре, отколкото живеят.

Разграничаване метод физическото фиксиране, което се основава на излагане на висока температура в микробна клетка, и химични методи, включващи използването на химикали, причиняващи коагулация на цитоплазмени протеини.

- Физическата метод за определяне
стъкло пързалка с пинсети, като наркотици или I и II за пръстите на десния край ръка ход нагоре и плавно движение се извършва 2-3 пъти над горната част на пламъка на горелката. процес All определяне не трябва да отнеме повече от 2 секунди. проверява по следния метод Надеждност фиксиране: повърхност без цитонамазка слайд се прилага върху гърба на лявата ръка. С правилното фиксиране петно ​​на стъклото трябва да е гореща, но не и да предизвика усещане за парене.

- Методът за определяне на химически
За определяне на петна също се използват химикали и съединения - етил (вино) алкохол 960, ацетон, смес от Никифоров (смес от алкохол и упойка етер в съотношение 1: 1), течен Carnoy на (алкохол 96% 60 мл хлороформ с 30 мл ледена оцетна киселина 10 мл).

За предпочитане счита лек химически фиксиране (ацетон, сместа Никифоров, Carnoy на течност) [15].

стъклен слайд с тампона суши се потапя в бутилка с фиксиращо средство за 10-15 минути и след това се суши на въздух.

Освен осъществява класически оцветяване по Грам на метод намазка. За осъществяване на този оцветител специални търговски багрила като фирма или BioMerioux бои, приготвени в лабораторията може да се използва.

Оцветяване по Грам се отнася до метод за боядисване комплекс. За сложни методи за цвят петно ​​повлияят две бои, едната от които е основен, а другият е - по избор. Също оцветяване материали, различни избелващи агенти, използвани в сложния процес за боядисване: алкохол, киселини, и т.н.

Feature оцветяване по Грам е различно третиране на различни микроорганизми да оцветители Трифлик групи: тинтява, метил или кристал виолет. Микроорганизми, принадлежащи към групата на Грам положителни (Грам +), например стафилококи, стрептококи, произвеждат силна връзка с тези багрила и йод. Латекс микроорганизми не обезцветят при излагане на алкохол, при което, след допълнително оцветяване с фуксин Грам (+) бактерии не променят първоначално получени пурпурен цвят. Грам отрицателен (Грам) микроорганизми (Bacteroides, fuzobakterii и др.) Се получава кристален или тинтява виолетово и метилен йод е лесно унищожени от действието на съединение алкохол, при което те са избелени и след това боядисани магента придобиване червено.

Съотношението на микроорганизмите до Грам оцветяване е от голяма диагностична стойност.

Кристал виолет (магента Tsilya карболин) - карболин разтвор: 1 г кристален метил виолет смилат в порцеланов хаван с 5 г кристален карболовата киселина и няколко капки глицерин. По време на омесващия добавя на малки порции 10 мл алкохол. След razotret багрило и се добавя при постоянно разбъркване, 100 мл дестилирана вода. Разтворът на багрило се филтрува през филтърна хартия мокър. Magenta е много стабилна и може да се съхранява дълго време в тъмни стъклени бутилки запушени.

разтвор Lugol - 2 г калиев йодид се разтваря в 5-10 мл дестилирана вода и след това се прибавя 1 г кристален йод, оставя за няколко часа, докато се разтвори и след това се излива излива 295-290 мл дестилирана вода.

Magenta алкохол-вода (разтвор Pfeiffer) - 1 част карбол фуксин Tsilya излива 9 части дестилирана вода. Решението не е много стабилен, така че се приготвя в малки количества непосредствено преди употреба.

  1. Фиксираната намазка оцветени с филтърна хартия основна боя - карбол основния разтвор на кристал виолет. Оцветяването трае 1-2 минути.
  2. Хартия отстранява изпразни излишната боя и, без промиване с вода препарат, излива разтвор Lugol в продължение на 1-2 минути, докато почерняване на лекарството.
  3. разтвор Lugol декантира. предметното стъкло се потапя няколко пъти в чашата за обезцветяване намазка с spitrtom, процес избелване е завършено, когато се отделя от ограничителя на ход боядисани пурпурен течни потоци.
  4. Лекарството се промива добре с вода от чешмата.
  5. Dokrashivayut алкохолно-воден разтвор на фуксин.

Оцветяването трае 1-2 минути.

Грам (+) бактерии цветни основна боя в тъмно лилав цвят, Грам (-), допълнително наблюдение оцветяване придобие ярък цвят магента.

Недостатъците на този метод трябва да включват петна някои трудности при разпределяне на определени микроорганизми от Грам (+) или Грам (-) на цвят поради тяхната неравномерно възможност оцветяване се дължи на наличието на вагиналната намазка голям размер на слуз и разнообразие от микроорганизми. В тази връзка, Mavzyutov AR и др. Ние предложи използването на микроскопско диагноза на BV оцветяване с метиленово синьо [15].

Оцветяване с метиленово синьо
Получаване на разтвори:

  • Solution "А": 2,5 грама кристалвиолет разтваря в 250 мл дестилирана вода (премине 3-4 седмици);
  • Solution "В": 12.5 г натриев карбонат, разтворен в 250 мл дестилирана вода (премине 2 седмици преди отлагане на кристали.);
  • Йод разтвор: 1 г натриев хидроксид, разтворен в 7 мл дестилирана вода, след което се прибавят 5 г кристален йод и калиев йодид до 0.25, към получения разтвор се добави фракционни 243 мл дестилирана вода;
  • Промиването течност избелване: 75 мл ацетон се прибавя към 175 мл етилов алкохол;
  • Сафранинът разтвор: 5 г шафранинов разтваря в 15-20 мл етанол и се прибавя към 250 мл дестилирана вода.
  1. Натривки са фиксирани над пламъка на горелката. На issleduemngo без стъклен материал част се прилага едновременно с 6 капки разтвор "А" и "В". Се смесва със стъклена пръчка и разпределя равномерно върху стъклото. Изложение - 2 мин.
  2. Премахване на боя остатъци и йоден разтвор се прилага в продължение на 2 минути.
  3. Почистете остатъците йод и да предизвика 10-20 капки зачервяване течност, повтаряща манипулация, за да завършите избелване, постоянно разклащане на стъклото.
  4. Измива се с вода от чешмата.
  5. Dokrashivayut Сафранинът 2 минути.
  6. Промива се с вода, суши се, mikroskopiruyut.

С това оцветяване настъпва оптимални лекарство метиленово синьо оцветяване Грам положителни флора в синьо тон и Грам - в интензивно синьо-черен цвят.

Директен микроскопия най-добре при сравнително ниско увеличение (х окуляр 2-7), за да се увеличи зрителното поле и максималното покритие на всички обекти, присъстващи в материала.

Доминирането на лактобацилите, липсата на грам-отрицателни микрофлора, спори, мицел, pseudohyphae, присъствието на белите кръвни клетки и единствен единичен "чисти" на епителни клетки, съответно, фаза на менструалния цикъл.

Типично състояние на нормалното местообитание на влагалището.

Умерено или малко количество от млечнокисели бактерии, присъствието на Грам-положителни коки, грам-отрицателни пръчки. Намерено бели кръвни клетки, моноцити, макрофаги, епителни клетки.

Често се наблюдава при здрави жени, по-рядко се придружава от субективните оплаквания и клинични прояви.

Малко или Lactobacilli, изобилие полиморфна грам-положителни и грам-отрицателни прътовиден и coccal микрофлора; наличието на "Ключ" клетки. Левкоцитна брой променлива, непълноти или отсъствие на фагоцитоза. Полимикробните модел цитонамазка.

Бактериалната вагиноза

Голям брой на белите кръвни клетки, макрофаги, епителни клетки, изразено фагоцитоза, морфологичен пейзаж възпалителен процес.

При откриване на: Neisseria гонорея, Trichomonas, мицел psevdogifof спор изложени съответния етиологичен диагноза - гонорея, Trichomoniasis, гъбични вагинит [7, 8].

Предложената класификация е проста и информативен като съчетава микробиологична интерпретация на вагинална намазка, характерна клинична картина и съответната нозологична форма.

Най-важното диагностична стойност в BV е идентифицирането на "Ключ" клетки.

Количествен критерий "Ключ" клетки за откриване остава спори, защото досега не са окончателно решени по въпроса за стандартите за индикации за вагинална микрофлора. Въпреки това е приета действителност в проценти разпространението Lactobacillus род бактерии, което позволява да се използва като основен изследването с BV. В полза на това показва невъзможността на прекомерни развитие съпътстващи флора и поради наличието на "Ключ" клетки като същевременно се поддържа количествен нивото на лактобацилите. Това автоматично елиминира кализирането на вагиналната среда и т.н. характерни за BV. В момента има няколко класификации на микроскопичен BV.

Mavzyutov AR и сътр. BV диференциация, предлагани от трите власти:
1 степен - компенсирано, характеризиращ се с пълно отсъствие на изпитвания материал при микрофлора непроменени епителни клетки. Това състояние на вагиналната лигавица не се разглежда като патологични, но липсата на laktobakterialnoy флора показва основното възможността за утаяване празен екологична ниша работи последователно с външни микроорганизми гениталиите и последващо образуване на BA поради нарушения на фона на липсата на естествени млечнокисели бактерии колонизиращи лигавицата резистентност. Описани форми могат да се наблюдават под микроскоп в резултат на "прекомерно" обучение на пациента да посети лекар или след интензивни химиотерапевтични лекарства широк антибактериален спектър на действие (цефалоспорини, макролиди, и т.н.).
2-ри етап - subcompensated, характеризиращ се с количествено намаляване на лактобацилите, съобразен с увеличаване размера на полиморф gramvariabelnoy съпътстващи бактериална флора, и появата в областта изглед на устройството от (1-5) "Ключ" клетки при относително умерена левкоцитоза (15-25 в зрителното поле). "Ключ" клетки могат да присъстват като покрития бактериална флора извън епителни клетки и бактерии, съдържащи вътреклетъчно поради неспецифичната фагоцитоза на епителни клетъчни функции.
3 степен - декомпенсирана е симптоматично съгласно симптоми на BV и микроскоп, характеризиращи се с пълната липса на лактобацилите, когато цялото зрително поле е изпълнен с "Ключ" клетки. Бактериална флора в този случай могат да бъдат представени от много различни, в отсъствието на лактобацилите микроорганизми в монокултура или различни и специфични комбинации морфолин [15].

Един от методите за лабораторна диагностика, която дава възможност да оценим напълно на качеството и количеството на вагиналната микрофлора е бактериологично изследване. С развитието на този метод се променя и представяне на състава на вагиналната микрофлора. Подобряване метод бактериологични диагностика - подобряване на качеството на хранителна среда, методите за култура, различни техники за изолиране и идентифициране на микроорганизми популяризирани постъпки за промяна на критериите за правила. Първоначално беше установено, че в допълнение към лактобацили в състава на нормалните микрофлора може да бъде условно патогенни микроорганизми (Staphylococcus, Streptococcus, някои грам-отрицателни бактерии) [13, 14]. Изпълнение от началото на 70-те анаеробни техники за обработка доведе до нови значителни корекции на концепцията за "нормални" вагинални микрофлора. Както подобряване технология и идентифициране анаеробни строги анаероби значително разширени гама от микроорганизми, които са част от нормалната вагинална микрофлора [16, 17].

Интернет регистър

ВНИМАНИЕ! При избора на удобно за Вас време, имайте предвид, моля, работно време, съответстващи на стаята за лечение.