Методи за оцветяване микроорганизми
Прост метод за оцветяване. При този метод се използва само едно багрило. В определен лекарство пуснат на мост над чашата за източване, разтворът се излива в метиленово синьо (петно за 4-5 минути) или карбол Pfeiffer фуксин (1-2 минути) или карбол тинтява виолетово (1-2 минути). Боята се промива с вода от бутилката, препаратът се суши с филтърна хартия и причина капка потапяне масло. Готовият продукт се поставя на сцената и mikroskopiruyut.
Комплекс (диференциация) техники за оцветяване. Те се различават от обикновените методи че препаратът се оцветяват с различни цветове, и в някои случаи използването на по-специални реагенти (разтвор на Lugol, киселини, и т.н.). Сложните методи позволяват да се идентифицира наличието (или отсъствието) на отделните структурни елементи и някои органични съединения, клетките, и това се определя багрилни свойства на всеки вид микроби.
метод на оцветяване по Грам. Фиксираните слайдовете се оцветяват с тинтява виолетово карбол за 2-3 минути. Без промиване с вода, боята се оттича в продължение на 2-3 минути в разтвор на Lugol се прилагат към лекарството (кристален йод - 1 гр калиев йодид като йод Разтворител - две грама; дестилирана вода - 300 мл). разтвор Lugol се изпразва; препарат, без промиване с вода, третира се с 96% алкохол в продължение на 30 секунди, а след това и се промива с вода. След това съставът освен работен разтвор червено багрило (1 мин), промива отново с вода, суши се с филтърна хартия и mikroskopiruyut.
На оцветяване по Грам един бактериални видове, които не се обезцветени след първичен алкохол оцветяване и запазват лилав цвят; те се наричат грам положителни. Други видове алкохол променят цвета си, а след това да приемат допълнително цвят магента и порозовяването-червен цвят; те се наричат грам-отрицателни. Оцветяване по Грам поради структурните характеристики на клетъчната стена в грам-положителни и грам-отрицателни бактерии групи, дължина и форма на неговите пори, неравномерен химичен състав и структура на пептидогликановия слой на клетъчната стена на микроорганизми. Ярко виолетов (или кристално виолетово) и нуклеинова киселина в цитоплазмата на присъствието на йод (разтвор на Lugol) за образуване на стабилен комплекс, който е неразтворим във вода и умерено разтворим в алкохол. Поради това, под въздействието на алкохол в продължение на 30 секунди с помощта на многослойни бактерии пептидогликан рамка (гр) не губи цвета си. В грам-отрицателни бактерии пептидогликановия слой има по-големи пори, което улеснява преминаването на алкохол; полученият комплекс се унищожава, клетката е избелени.
техники за оцветяване киселина, алкохол, алкално-устойчиви бактерии. Микробите на тази група (Mycobacterium туберкулоза, paratuberculous ентерит при говеда, човешки проказа и др.) Принадлежат към грам-положителни бактерии. За тяхната диференциация се използват специални методи за оцветяване, въз основа на различна химична структура на цитоплазмата и на клетъчната мембрана. Съставът на тези бактерии включват значително количество мазнина, восък вещества, по-специално стеаринова киселина (включително киселина ftionovoy до 40%), така че те са трудно да се възприемат цвят. Но ако те са рисувани под влиянието на дезинфектант, че е трудно да се обезцвети киселини, алкохоли и бази.
Най-често срещаният метод на оцветяване бактерии от тази група е метод Ziehl-Neelsen. В определен лекарство поставя парче бяла филтърна хартия (за защита от утайката) се излива в разтвор на карболовата фуксин, препарат под загрява в продължение на пламък, докато парата и се оставя да "мост" (5-7 минути). След това, боя се излива от лист хартия (без измиване) и обезцветява с 3-5% воден разтвор на сярна киселина (5-7), промива се добре с вода и след това се оцветяват с метиленово синьо Leffler (4-5 минути). След препарат се промива с вода и се суши с филтърна хартия. Киселина (алкохол, алкално-устойчиви) бактерии са оцветени червено (не потъмнява киселина) и киселинно-бързо - в синьо петно защото фуксин лесно, те са лесно обезцветени киселина и възприемат вторичен цвят синьо.
Методи на непостоянни оцветители елементи микробни клетки. В структурата на микробна клетка разграничи постоянни и непостоянни елементи. Постоянното - е цитоплазмата, черупката, ядрената вещество; Периодично - спор, капсула, камшичета, които при определени условия се образува само от отделните видове бактерии, обаче са специфични характер.
Okraskaspor. Пръчковидни бактерии, които образуват в околната среда (почва, вода, храна на хранителна среда) устойчив форма на съществуване - спора наречен бацили. Когато спорулация възниква в клетъчните процеси, отговорни за кондензация на цитоплазмата, намаляване на свободна вода (до 40%). Цитоплазмени съдържание обхванати многослойни мембрани, химическия състав на което осигурява добри спори устойчивост на топлина, сушене, действие на много киселини, основи, багрила. Когато завърши спорулация спор лежи свободно, без остатъчни вегетативни клетки; когато груб процеса на спора, в зависимост от вида на микроби, или разположен в центъра на клетка или в края (терминал) или между края и център клетка (който става към края). Когато микроскопски препарати, оцветени прост метод или Грам видим цвят част вегетативни клетки и неоцветени и рефрактилни спори светлина.
Ауески метод. формулировка се суши на въздух, без фиксиране, гравиран 0.5% солна киселина със загряване (2-3 минути), охлажда се, промива се с вода и се фиксира в пламъка. След това лекарството се поставя парче филтърна хартия, тя се излива върху разтвор Ziehl е, оцветени с подгряване на изпарения (7-8 мин), боята се излива, препаратът се обработва с 5% разтвор на сярна киселина (5-7), промива се добре с вода. Освен това, оцветени с метиленово синьо (5.4 минути), отново се промива с вода и се суши с филтърна хартия. Mikroskopiruyut чрез потапяне: вегетативно част на клетката - сини, спорове - червено.
метод Moeller. подготовка Фиксирана пламък се ецва с 5% хромова киселина (2-3 минути), промива се с вода, суши се с филтърна хартия. Продължете, както в предишния метод. Цветът на резултат е същият: вегетативно част на клетката - сини, спорове - червено.
метод Zlatogorova. Процесът на оцветяване, както в предходните два метода, но без байц. След оцветяване на вегетативни клетки - синьо, спорове - червено.
метод Пешков. Намазка фиксирана, метиленово синьо багрило с затопляне до кипене измиване. Dokrashivayut 1% воден neytralrota (10 секунди), промива се, суши се. Спорите се оцветяват в синьо вегетативни клетки - червено.
Покритие на капсули. Капсула - производно външен слой обвивка. Това е муцин субстанция, високо полизахарид молекулно тегло. В присъствието на патогенни бактерии kapsuloobrazuyushih капсула се наблюдава само в заразения организъм като защитно устройство срещу фагоцитоза (в изкуствен носители само капсули се получават чрез прибавяне на кръвен серум или дефибринирана кръв). Kapsuloobrazovanie бележка от антракс, злокачествен оток, diplokokkovoy септицемия. Капсулен вещество е силно оцветени, така че неговото откриване с помощта на специални техники за оцветяване, въз основа на метахроматична явление.
метод Mihina. подготовка Фиксирана кръв намазка или отпечатъка на телесната тъкан (черен дроб, далак, бъбрек) се оцветяват с метиленово синьо преди пара затопляне (5-7 минути). Боята се излива бързо се промива с вода (не може да се измие), изсушена с филтърна хартия. Микробните клетки се оцветяват в синьо, капсула - в светло розово.
метод Романовски-Giemsa. Фиксирани образци се оцветяват, както е посочено по-горе: Получаване намазка се поставя в блюдо на Петри върху стъкло или дървени пръчки отпечатък надолу под препарат излива боя, петно 40-50 минути. Резултатът е същият, както при боядисване на Mihin: микробни клетки се оцветяват в синьо, капсула - в светло розово.
Olta метод. Прясно воден 2% разтвор шафранинов се излива върху лекарството и се инкубират 5-7 минути. След това леко се промива с вода и се суши. Вегетативен клетка - тухла-червен капсула - жълто-оранжево.