Лабораторна диагностика на туберкулоза и микобактериози - studopediya

Белодробна и извънбелодробна туберкулоза, причинена от бактерии комплекс MTS (Mycobacterium туберкулоза комплекс), както и не-туберкулозни микобактерии комплекс MAC (M.avium комплекс, M.kansassii). Mycobacterium комплекс MAC често удари хора с имунодефицитни състояния с различна етиология (особено СПИН). Методи за микробиологична диагностика на туберкулоза е показано на Схема 15.

Шофиране 15.Mikrobiologicheskaya диагностика на туберкулоза

Bioprobana морски свинчета и зайци.

Молекулярна диагностика. PCR за откриване на специфични ДНК фрагменти MTS Mycobacterium комплекс (М. туберкулоза, М. bovis / BCG, M.africanum) в материала на пациента и диференциално ferentsirovki от nontuberculous Mycobacterium туберкулоза (комплекс MAC - М. авиум, М. kansassii).

Материалът за изследването е храчки, бронхиални промивки, стомашен бронхоалвеоларната течност, плеврален ексудат, кръв, урина, изпражнения, синовиална течност, биопсии на различни тъкани.

Първоначална обработка на материала се обработва за обеззаразяване присъствието на чужда микрофлора и втечняване и хомогенизиране флотация храчки, бронхоалвеоларен течност и т.н. Към този материал се третира с муколитични (N-ацетил # 946; цистеин) и антибактериално (1-2% NaOH) вещества, се центрофугира 20 минути при 3000 грама и супернатантата се отстранява. Пелетата отново се суспендира в малко количество IR.

Микроскопско метод включва микроскопско изследване на тест намазка материал обагрени-SPE-тривиално методи за идентифициране киселина-

резистентни бактерии, които дава предварителен извод. Отрицателният резултат микроскопско изследване не е основание за отстраняване на диагноза "туберкулоза". Понастоящем, основният метод за откриване на Mycobacterium е луминисценция

процент микроскопски препарати, оцветени с ауламин концентрация 1: 1000 в продължение на 15 минути, последвано от избелване на 3% солна киселина в алкохол в продължение на 30 секунди, измиване и оцветяват тампон за 1 минута с воден разтвор на родамин 6G в концентрация 1: 5000. Микобактерии са светло жълта светлина на тъмен фон. метод Ziehl-Nielsen се използва по-рядко (фиг. 20). Обикновено Ziehl-Neelsen оцветени петна на чисти култури. метод ограничаването микроскопия е, че той не позволява да се направи разграничение между микобактерии и други киселина-бързо mikroor организми.

Фиг. 20. нарастък бацил (Mycobacterium туберкулоза) в слюнка на пациента. Оцветяването Ziehl-Nielsen. Рубинено червен пръчки (единична или клъстери) на син фон. х 900

Бактериологични метод е основният мето-къща диагностициране на туберкулоза, с висока чувствителност и специфичност.

За отглеждането на микобактерии като метода на Microculture Цена. За тази цел, няколко тесни предварително bations очила правят дебели намазки, суши се, obrabaty-vayut няколко минути 2-6% сярна киселина, след това се неутрализира. след това стъкло се потапя в епруветки цитратна кръв хемолизирани с разреждане от 1: 4-1: 8, и се поставят в термостат. 7-14 дни стъкло е отстранена, медикаменти рекорд, грапавостта на дъба от Ziehl-Nielsen и mikroskopiruyut. Вирулентни щамове на микобактерии, Функциите rizuyutsya нарастващи като влека или плитка чрез образуването на фактор кабел.

Фиг. 21. Колонии на туберкулозните бацили в околната среда Lowenstein-Jensen

Идентификация на изолирана култура на микобактерии нивото на видове се извършва по обичайния схемата въз основа на проучване на типична морфология характерни културни свойства (при температура оптимално, pigmentooobrazovaniyu на растеж на тъмно и светлина), биохимична активност (присъствието на нитрат редуктаза, каталаза, уреаза pirazinamidazy, продукти с никотинова киселина - ниацин проба възстановяване прежди Ratov и калиев телурит, хидролизата на Tween-80) и се използва молекулен генетичен (ДНК хибридизация) и химически мет редове, което намалява времето за лабораторна диагностика на туберкулоза до 4-7 дни.

За определяне на ниацин за микобактериална култура в течна среда пи tatelnoy се прибавя KCN 1 мл разтвор и 1 мл 5% разтвор на белина; положителна реакция се характеризира с появата на ярко жълт цвят. След като реакционната смес се неутрализира чрез прибавяне на резултатите KCN в епруветки 3-5 мл 10% разтвор на натриев карбонат.

Той също се провежда за определяне на чувствителността на микобактерии за антимикробна метод на абсолютните концентрации (най-често на течни хранителни среди, или по метода на Microculture от Прайс, като време от 3 седмици до 3 месеца, или върху твърда среда LJ) с оценката на закърнели резултати растежа или нитрат редуктаза дейност , което е важно за целите на адекватна терапия. Стабилност граници нарастък бацил до 5 мкг стрептомицин / мл, PAS - 10 мкг / мл, tubazid - 1 мкг / мл, циклосерин и етионамид - 30 мкг / мл. Проектиран като PCR за определяне на чувствителността на микобактерии до химиотерапевтични лекарства и антибиотици. Други методи за определяне на лекарствена резистентност на М. туберкулоза са биологичен (LRP -луцифераза-Репортер фаг - резистентен Mycobacterium луминисценция в присъствието на генетично модифицирани бактериофаги, носещи гена на луцифераза) и молекулно генетична базирани на PCR.

Биоанализ разпределение raneeispolzovalasdlya микобактерии чрез подкожна инфекция на морско свинче (податливи на М. туберкулоза) и зайци (чувствителен към М. bovis) снимки на пациента, последвано от наблюдение на животните (до 4 месеца). След този период, или смърт на животните е проведено микроскопични и бактериологични органи за изследване с цел откриване на туберкулозата бацили. Понастоящем биоанализ в практиката на etsya рядко поради загуба на резистентни щамове на микобактерии индуцира типичен инфекция и смърт на животните.

Молекулярна диагностика. PCR беше разработен, което позволява да се открие микобактериални видове специфични нуклеинови киселини MTS комплекс (М. туберкулоза, М. bovis / BCG, M.africanum) директно в клинични проби от пациент и диференциално ferentsirovat Mycobacterium туберкулоза от nontuberculous - MAC комплекс (М. авиум, М. kansassii). PCR метод е сравнима с бактериологично изследване, обаче, е бързо - в рамките на 24 часа.

В положителни резултати от изследователските методи на микроскопия и PCR диагностика на туберкулоза се потвърждава и препоръчва незабавно назначаването на анти-TB лекарства за конвенционална схема. Отрицателният PCR резултат за откриване на киселина бацили в намазки изключва наличието на туберкулоза комплекс MTS Mycobacterium, обаче в тази ситуация на-значителни антимикробни средства, активни срещу не-туберкулозни микобактерии комплекс MAC. В други случаи е необходимо да се изчакат резултатите от бактериологичните изследвания-ТА.

Serodiagnosis. Разработен RSK, Phragmites и други серологични тестове за определяне на антитела в серума на пациенти с туберкулоза антигени на Mycobacterium туберкулоза, но диагностичната стойност на тези реакции не са.

Allergodiagnostics. Поставен интрадермален тест алергия (Манту) туберкулин - очи междина на фракция протеин, получен от филтрата чрез нагряване бульон на убити М. туберкулоза план култура. Счетоводен реакция се извършва за 24-48 часа. Пробата се използва за оценка на потока на туберкулозен процес, определяне на ефективността на една нация-vaktsi и подбор на лица за реваксинация срещу туберкулозно kuleza.