Изследователски методи в хистология
Има следните видове микроскопия:
1) светлинна микроскопия (най-често срещаният тип на микроскопия с резолюция на микроскопа е 0.2 m) .;
2) UV микроскопия (резолюция на микроскопа е 0.1 m);
3) флуоресцентна микроскопия (използван в теста за определяне на хистологичен получаването на някои химически структури);
4) фазово контрастна микроскопия (използван за откриване и изследване на определени структури в проби неоцветени тъкан);
5) поляризиращ микроскоп (използван главно за изучаване структури влакна);
6) тъмно поле микроскопия се използва за изследване на живи същества;
7) микроскопия при падаща светлина (предназначена за изследване на дебели обекти);
8) Електронно микроскопия (най-модерната микроскоп поглед с резолюция от 0.1-0.7 нанометра).
Това е най-често се използва в експерименти върху животни. interferonometrii метод позволява да се определи масата на сухото вещество в хола или неподвижни обекти.
метод клетъчна култура - нараства клетките в епруветки или в специални капсули в тялото и последващо изследване на живите клетки под микроскоп.
Vital метод оцветяване - въвеждане на животни в кръвта или в коремната багрило кухина (trepanovogo синьо), които, когато живота на животното се улавя от някои клетки - макрофаги, но след клането на животното и получаване на лекарството се определя и се преброяват клетки, съдържащи оцветител.
Immunomorfologichesky методи позволяват използване на предварително имунни реакции, извършвани (въз основа на взаимодействието на антиген - антитела) за определяне на субпопулация на лимфоцити, степен на чуждестранен клетки проведе хистологично типизиране на тъкани и органи, т.е., да се определи тяхната хистосъвместимост допълнително трансплантация ...
диференциален метод центрофугиране - изследване на отделните органели или техни фрагменти, изолирани от клетките. За тази цел, на изпитваната проба се стрива тяло, изсипва се нормален физиологичен разтвор и след това се диспергира в центрофуга с различна скорост (от 2-150000. 1 мин). В резултат на центрофугиране интересни фракции след това се изследват чрез различни методи.
методи морфометрични - количествени методи. Те ви позволяват да се определи размера и обема на ядрото - kariometriya, клетка - цитометрия органели - електронен морфометрията, както и за определяне на броя на различните клетъчни популации и субпопулации. Тези методи се използват широко в научни изследвания.
Различни експериментални методи - храна и вода натоварване, физически методи (UHF, микровълнова печка, лазери, магнити). Те се използват за изучаване на взаимодействието на структурата на лихви по някакъв ефект, и в съчетание с методите на морфометрия, cyto- и хистохимия. Тези методи се използват и в научните изследвания
изследвания. По този начин, основните и най-често срещаният метод е изучаването на хистологията в микроскопия.
Получаване на хистологичен препарат включва следните стъпки.
1. Capture материал - парче тъкан или орган. Когато ограда материал е необходимо да се спазват следните правила:
1) ограда материал трябва да се извърши възможно най-рано след смъртта или клането на животното, ако е възможно, от дневната обект как най-добре да се запази структурата на клетки могат да бъдат изследвани;
2) ограда материал трябва да се извършва с остър инструмент, така че да не травматизирам тъкан;
3) Дебелина на парчета не трябва да превишава 5 mm, към разтвора на фиксиране може да проникне през цялата дълбочина на тъканта;
4), трябва да бъдат сигурни, да се направи маркировка парче, посоченото име на тялото на броя на животните или върху името на лицето, датата на вземане на проби.
2. Крепежни елементи. Тази стъпка се извършва, за да спре метаболитните процеси в клетката и да го предпази от разграждане. За това, за да поеме проучване парче тъкан се потапя в фиксиращ разтвор. Разтворът може да бъде прост (алкохол или формалин) и комплекс (разтвор Сагпоу, фиксатор
Tsinker). В държача предизвиква денатурация на протеините и запазва клетъчна структура в състоянието, в близост до живот. Фиксирането може да се извърши също чрез замразяване - охлаждане с течен азот или въглероден двуокис поток.
3. Напълнете парчета тъкан в уплътняващия среда (парафин смола) - или замръзване. Тази стъпка е необходима, за да се впоследствие от тъканта може да се произведе тънък сечение.
4. Получаване на секциите на микротом или ultramicrotome помощта на специални ножове. Секциите за svetovoymikroskopii залепени върху стъклени плочки. и за д - монтирана на специална мрежа.
5. Покритие или контрастни секции (за електронна микроскопия). Преди боядисване на парче, което искате да премахнете запечатване среда - извършване deparafirovanie. Използване на цветови контраст на структурите се постига. Багрилата могат да бъдат разделени на основния, киселинни и неутрални. основни багрила (хематоксилин) и кисел (еозин) е най-широко използвани. Често използвани и багрила.
6. осветяване секции в ксилол и толуол. Те са затворени в смола (балсам и полистирен) и покривно стъкло.
След тези процедури, лекарството може да се изследва под микроскоп. Поставени под стъклени секции за светлинна микроскопия на дълго може да се съхранява и използва повторно. Всяка от секциите за електронна микроскопия се използва само един път, докато е снимана и изследването в структурата на тъканите, произведени от електрони дифракция.
Ако тъканта има последователност на течност (например, кръв, костен мозък), след това лекарството се формулира като намазка върху предметно стъкло, което след това също така фиксиран, оцветени
От нечупливи паренхимните органи, направени под формата на препарати на органи разпечатка извършва фрактура на орган, а след това се прилага на мястото на пързалка вина, на която клетките се придържат наличност. След това лекарството се записва и се изследва.
Някои органи (например, мезентериална pial) или на насипни продукти съединителната тъкан са направени от разтягане на фолиото или ги притиска между две стъклени плочи, последвано от определяне и леене в смолата.
Мобилен: определението, цялостната структура на плана. Hyaloplasm: химичен състав, значение. Органели и включване: определението на понятия, класификация.
Cell - елементарни структурни, функционални и генетика Чески единица, състояща се от всички растения и животни ?. Човешкото тяло възрастен се състои от приблизително 10> 3kletok, кото? Ръж разделен на повече от 200 видове се различават значително? Schihsya техните структурни и функционални характеристики. Vmese? Тези с тези на всички видове клетки се характеризират с приликата на общите органи? Нето и структурата на най-важните компоненти.
компоненти на клетката. Всяка клетка се състои от два основни компонента - ядрото и цитоплазмата. В ядрото се съдържат хромозоми? -Несъдържащ генетична информация в резултат на процеса на транскрипция е постоянно селективно чете и изпраща на цитоплазмата, където тя ще следи напредъка на множество процеси zhiz? Клетки неактивни, по-специално, балансиран процеси Сай? Защото, анаболизъм (от гръцки. Anabole - увеличение), и унищожаване kataba изъм (от гръцки kataballo - ?. унищожи). Тези процеси, изпълнявани ли са в цитоплазмата се дължи на взаимодействието на нейните компоненти.
цитоплазмени компоненти. В цитоплазмата е отделена от външната страна (за тази клетка) среда външната клетъчна мембрана (plasmolemma) и съдържа органели и включвания, потопени в hyaloplasm (клетъчна матрица).Органели - присъства неизменно в цитоплазмата на структурата. специализирана да изпълнява специфични функции в клетката. Те се разделят на общата стойност на органелите и специалната група? Нели.
органели обща стойност намира във всички клетки и QS? Дима да се осигури препитанието си. Те включват митохондрии, рибозоми, ендоплазмения ретикулум (EPS), Golgi комплекс, лизозоми, пероксизоми, клетъчен център, компонентите на цитоскелета ?;
(2) Специални органели са налице само в определени клетки и гарантират спазването на техните специализирани функции. Те включват реснички, камшичета, микровласинките, миофибрили, акрозомната (сперматозоиди). Специални органели са образувани по време на развитието на клетъчни органели като производни с обща значение.
Структурата на много органели включва начално биологична мембрана, така че да се разделят органели мембрана и не? Мембрана. Чрез мембрана органели са митохондрии, EPS, Golgi комплекс, лизозоми, пероксизоми, до не-мембранни рибозомите, центъра на клетка, ресничките, микровласинките, камшиче, някой? Nents цитоскелет.
Функционални системи (устройства) клетки - сложни органели, които са под контрола на ядрото се гарантира съответствие с важно клетъчни функции Nation ?. Отличава: (1) синтетичен апарат; (2) единица енергия; (3) на устройството смилане бани вътреклетъчен (ендозомалната-лизозомна); (4) цитоскелет.
Включва - временни цитоплазмени компоненти, образувани чрез натрупване на метаболитни продукти на клетките. Ся разделена на няколко типа:
трофичен лецитин в яйчни клетки; гликоген; липиди се намират в почти всички клетки;
Секреторния: секреторни гранули в секретиращи клетки (зимоген гранули в асинарни клетки на панкреаса); секреторни гранули в жлезите с вътрешна секреция, и други;
отделителната: веществото трябва да се отстрани от тялото (например, гранули от пикочна киселина в тубулна епител);
пигмент: меланин, хемоглобин, липофуксин, билирубин и др.
В процеса на живот случайни примеси се натрупват в някои клетки: медикаменти; въглищни частици, силиций и така нататък.
В допълнение към структурите на цитоплазмата, която може да бъде ясно, приписвани на ОП? Ganellam или включванията, има голям брой различни? Профили транспортни везикули, които осигуряват не само прехвърлянето на вещества между различните компоненти на клетките, но също и тяхното частично преобразуване (обработка), поради наличието на ензими в мембраната, която образува стената им.
Мембранна структура (компоненти) клетка - кумулативната ранг за цитоплазмата на различни структури и ядро: plasmolemma редица органели, включвания, мехурчета транспорт и ядрената обвивка (karyotheca), които включват клетъчни мембрани ?. Последък? От различни мембранни структури на клетките са организирани по подобен начин. но се различават значително, на първо място, съставът на мембранните протеини, за определяне на спецификата на техните функции.
Hyaloplasm (клетъчен сок tsitozol, клетъчна матрица) - вътрешната среда на клетката, което представлява около 55% от общия обем. Това е сложен колоиден прозрачен ICI субект, където суспендираните включванията и органели и съдържа различни биополимери Най ?: протеини, полизахариди, нуклеинови киселини, и йони. Претърпява трансформации на тип gelzol. В hyaloplasm около? Идва повечето от междинни метаболитни реакции.
Мембранна структура клетки: сорта. СТРУКТУРА ultramicroscopic, актуализирайте стойността.
Основната структура на мембранните органели
Мембранни органели са затворени и изолирани части (отделения) в hyaloplasm с вътрешната си структура. Стената се състои от bilipidnoy техните мембрани и протеини като plasmolemma. Въпреки bilipidnye мембранните органели имат характеристики: дебелина bilipidnyh органели мембрани по-малко от plasmolemma (7 пМ до 10 пМ), мембраната се различават по броя и съдържанието на протеини, вградени в тях. Въпреки различията, мембраните на органели принцип имат същата структура, така че те имат способността да взаимодействат един с друг, вградени, сливане, разделение, otshnurovyvatsya. Цялостната структура на мембраните принцип органели на може да се обясни с факта, че те са оформени в ендоплазмения ретикулум, а след това става тяхната функционална преструктуриране в комплекса Golgi.
Митохондриите - най-изолираните структурни елементи на цитоплазмата на клетки, които имат висока степен на самостоятелно активност.
Смята се, че в миналото, митохондриите са били независими живи организми, а след това проникнали в цитоплазмата на клетката. където са сапрофитни съществуване.
Доказателство за това може да бъде присъствието на генетичния апарат на митохондриите (митохондриална ДНК) и синтетичен апарат (митохондриални рибозоми). Формата на митохондриите може да бъде овална, кръгла, продълговата или дори разклонена верига, но е доминиран от ovalnovytyanutaya.
Стената е образувана от две bilipidnymi митохондриалните мембрани, разделени с интервал от 10-20 пМ. Където външната мембрана покрива цялата периферия на митохондриите под формата на торба и го разделя от hyaloplasm. Вътрешната мембрана на митохондриите разделя вътрешната среда, при което се образува гънки в митохондриите - Crista. вътрешен митохондриите околната среда (митохондриална матрица) има фина структура и се състои от гранули (митохондриална ДНК и рибозоми).
Функцията на митохондриите - образуването на енергия под формата на АТР. Източникът на енергия на образуване на митохондриите е PVK (пируват), който е оформен от протеини, мазнини и въглехидрати в hyaloplasm. Окисляване на пируват се извършва в митохондриалния матрикс, и cristae на митохондриите електронен транспорт извършва, фосфорилирането на ADP и образуване на АТР. Получената митохондриална ATP енергия е единствената форма, която се използва от клетката за изпълнение на различни процеси.
По време на живота на клетката се появява непрекъснато актуализиране на митохондриите. Те възстановено старото разделение на митохондриите.
Ендоплазмения ретикулум (EPS) в различни клетки могат да бъдат предоставени под формата на резервоари на сплескан, тръбна или отделни мехурчета. Стената се състои от bilipidnoy мембрана.
Има две разновидности на EPS:
1) гранули (гранули или груб);
2) nezernistuyu (или гладка).
На външната повърхност на мембраните, съдържаща гранули ЕРМ прикрепен рибозом. В цитоплазмата време електрон микроскопски изследване могат да бъдат намерени два вида EPS, но един от тях има предимство, което определя функционалните специфичност клетки. Тези две разновидности на EPS не са отделни и различни форми, като по-подробно изследване може да открие преход от един вид в друг.
Функции гранулирани EPS:
1) Синтез на протеини за отделяне от клетката (износ);
2) отделяне на (разделяне) на синтезиран продукт hyaloplasm;
3) кондензация и модификация на протеин, синтезиран;
5) Синтез на компоненти bilipidnyh мембрани.
Smooth функция на EPS:
1), участващи в синтеза на гликоген;
2) Синтез на липиди;
3) детоксификация функция (неутрализация на токсични вещества чрез свързването им с други вещества).
Plate Golgi комплекс
комплекс плоча е известен като устройството транспорт на клетката. Plate Golgi комплекс (окото единица) представено чрез резервоарите натрупване на сплескани и малки везикули, обградени с bilipidnoy мембрана. Плаката се разделя на комплекс от субединици - dictyosomes. Всяка dictyosome е купчина сплескана резервоари, които са разположени около периферията на малки мехурчета. По този начин в резервоара на всяка плоска периферна част малко се разширява, а централната скосена. В dictyosome разграничат два полюса: tsispolyus (база насочено към ядрото) и transpolyus (насочена към tsitolemmy). Установено е, че подходящо транспорт tsispolyusu вакуоли, като се Голджи комплексни продукти, синтезирани в EPS. От transpolyusa otshnurovyvayutsya мехурчета, които носят тайната за plasmolemma за тяхното освобождаване от клетки. Част от малки мехури пълни с протеини, ензими, то остава в цитоплазмата и се нарича лизозома.
Plate функция на комплекса:
1) транспорт (изходи от клетъчните синтезираните продукти там);
2) кондензация и модификация на съединения, синтезирани в гранулирани EPS;
3) образуване на лизозоми (с гранулиран ЕРМ);
4) участва в метаболизма на въглехидрати;
5) Синтез на молекули, които гликокаликса tsitolemmy;
6) синтез, съхранение, отделяне муцини (слуз);
7) Модификация на мембраните синтезирани в EPS и тяхното превръщане в plasmolemma мембрана.