Имунохистохимично характеризиране на туморни клетки

Експертно мнение - MD, професор по патологична анатомия Медицински Факултет Медицински Университет MV Samoilov

Ръководството е направено в рамките на иновативна програма за обучение на Университета за приятелство Български народен, посоката на "експортно ориентирана комплекс на иновационни образователни програми по приоритетните направления на науката и технологиите"

Практически въпроси oncomorphology

Предмет номер 10 имунохистохимично охарактеризиране на туморни клетки. Тумор на епителната

Понастоящем имунохистохимичен метод на изследване е широко използван за откриване на неизвестен първичен тумор в присъствието на неговите метастази. От 10 до 15% от раковите метастази се характеризират с различни органи, кухини и лимфни възли.

Честотата на случаите, когато заболяването е придружено от развитието на метастази, и локализацията на първични тумори по време на морфологично изследване е известно, е 3-15% от всички ракови заболявания. Така локализацията на първичната камера се определя от средната продължителност на живота на 30-40% от пациентите, при аутопсия - 60-70%.

Имунохистохимично изследване в зависимост от морфологичния вид новообразувание помага да се изясни хистогенеза на тумора и / или коментар за вероятния локализацията на първичния тумор. Повечето от тези тумори са аденокарциноми на гърдата, дебелото черво, белите дробове, яйчниците, панкреаса, простатата и стомаха.

В случая с метастазирал аденокарцином задача имунохистохимични проучване е да се идентифицират най-вероятният източник на метастази.

За тези цели, че в момента се използва множество маркери включително cytokeratins 7 и 20, щитовидната транскрипционен фактор (TTF-1), СА125, CDX2, естрогенни рецептори, GCDFP-15, лизозим, mezotelin, простатно-специфичен антиген.

Цитокератин 7 (CK7) се отнася до семейството на междинно съединение протеин нишки, има молекулно тегло от 54 Ша се открива в различни видове жлезист епител. клон антитяло OV-TL (Dako) оцветяват цитоплазмени различни видове нормални и неопластични жлезите епителни клетки, включително дуктален епител. CK7 се открива в цилиндрични клетки и жлезист епител на белия дроб, цервикален, гърдата, жлъчните пътища и канализационните тръби на бъбреците. CK7 оцветява преходен епител на епитела на пикочния мехур на яйчниците и белите дробове. Понякога можете да намерите положително оценяване на ендотела на съдовете. На свой ред, CK7 не се експресира в епителните клетки на стомашно-чревния тракт, на простатата. Практически CK7 не се засича в хепатоцитите, епителен проксималните и дисталните извити тубули на бъбреците, миоепителните клетки, многослоен епител на кожата, езика, хранопровода и ectocervix. Моноклоналните антитела OV-TL идентифицират някои видове аденокарциноми и могат да бъдат използвани за диференциална диагноза между CK7-позитивни тъкани (като например рак на яйчниците и perehodnokletochny рак) и CK7-отрицателни тъкани (като например аденокарцином на стомашно-чревния тракт и рак на простатата).

Цитокератин 20 (СК20) е представител тип I кератин, който е директно изразено в епитела на стомаха и тънките черва, уротелий и Меркел клетки на кожата. Антитяло (клон Ks 20.8, Dako) реагира с подходящ протеин молекулно тегло от 46 Ша. CK 20 - е основният протеин на зрели ентероцити и гоблетните клетки; е специфично експресиран в епителните клетки на стомашната лигавица и тънките черва. Тя може също така да бъдат идентифицирани в аденокарциноми на дебелото черво, стомаха, панкреаса, жлъчни капиляри в муцинозни тумори на яйчниците, рак на пикочния мехур perehodnokletochnom и рак на клетката Меркел. От друга страна, в плоскоклетъчен рак, аденокарциноми на гърдата, белите дробове, на ендометриума, на не муцинозни овариални тумори и дребноклетъчен белодробен карцином CK 20 не е изразени.

TTF-1 - Nuclear транскрипционен фактор, който е протеин семейство хомеодомен NKX2 (молекулно тегло 40 Ша); изразена ембрионални и възрастни тъкани на белия дроб и щитовидната жлеза. Ядрата на повечето клетки на други органи - черен дроб, стомаха, панкреаса, тънкото черво и дебелото черво, бъбрека, гърдата, кожни, тестисите, хипофизата, рак на простатата и надбъбречната активен фактор не се съдържа. TTF-1 е открит в първичния белодробен аденокарцином и не се експресира в аденокарциноми на рак на дебелото черво и на гърдата. Антитела на TTF-1 са ценен маркер за диференциална диагноза на аденокарцином на белия дроб метастази на рак на гърдата, и мезотелиом. При определяне на белодробни аденокарциноми използва TTF-1 оцветяването е по-специфично от използване antisurfaktantnyh антитела.

Лизозим катализира хидролизата на някои мукополизахариди на бактериите клетъчната мембрана. Използва се за идентифициране на тумори на хистиоцитите и левкемията миелоидна клетка серия. Той е открит в клетки от далак, бял дроб, бъбреците, кръвни левкоцити, плазмени клетки, слюнка, мляко и слъзния флуид.

Mezotelin - клетъчен гликопротеин (молекулно тегло 40 Ша), се намира на повърхността на мезотелиални клетки и е свързана с механизмите на клетъчна адхезия. Той също така разкри в мезотелиом, епителните рак на яйчниците и някои плоскоклетъчен рак. Clone 5B2 (Novocastra) петно ​​епителоидна мезотелиом и аденокарцином на белия дроб, яйчниците, рак на перитонеума, ендометриума, рак на панкреаса, рак на стомаха и дебелото черво. Антителата не реагират с бъбречна тъкан, черния дроб, плацентата, кожата и щитовидната жлеза. Mezotelina много общо мезотелиални клетки, които са образувани от злокачествен мезотелиом и яйчниците цистаденокарцином. Тези антитела, заедно с анти-калретинин могат да бъдат използвани за идентифициране мезотелиоми.

CDX2 - прокариотна рекомбинантен протеин, съответстващ на амино киселина N-крайната част на молекула CDX2 лице. Това е специфичен транскрипционен фактор на тънките черва клетки. Cdx2 ген кодира чревния-специфичен транскрипционен фактор, неговата протеин се експресира в ранните етапи на развитие на тънките черва и може да направи разлика в регулирането на пролиферация и диференциация на епителните клетки на тънките черва. Той играе важна роля в образуването на клетъчна диференциация в зрели ентероцити. Clone AMT28 (Novocastra) реагира с протеин 40 kDa, който се намира в ядрата на клетките. Тя се изразява в ядрата на епителните клетки на червата от дванадесетопръстника до ректума. CDX2 протеин се експресира в първични и метастатични тумори на дебелото черво, както се вижда от чревната метаплазия и стомашно чревен вид рак на стомаха, на свой ред, не е открита в нормални епителни клетки на стомаха. Този протеин се намира само в ядра на колонни епителни клетки и раковите колоректален аденокарцином, по този начин може да се използва за идентифициране на метастази на рак на дебелото черво.

СА125 - рак на яйчниците протеинов антиген. Моноклонално антитяло (клон Ov185: 1, Novocastra) признае муцин-гликопротеин като молекулно тегло от около 200 Ша. Антителата бяха оцветени различни тумори, такива като аденокарцином на дебелото черво, аденокарцином на гърдата, на матката тумор, бронхо-алвеоларен рак, ендометриален и яйчниците серозен аденокарцином.

ER - естрогенни рецептори. Клон 6F11 (Novocastra) взаимодейства с естроген рецептор алфа. Антителата бяха оцветени ядра с естрогенните рецептори в епителната на матката и гладки мускулни клетки, и на млечната жлеза епителни ядра. Идентификация на рецептори за стероидни хормони са широко използвани при лечението на хормон-зависими тумори. Наличието на естрогенен рецептор е маркер за рак на гърдата, и прогноза може да бъде показателно за заболяване и ефективността на ендокринната терапия.

Простата-специфичен антиген (PSA) - е гликопротеин. Clone ER-PR8 (Dako), получен с протеин молекулно тегло от 35 Ша. PSA имунохистохимия и биохимично различен от друг широко използван рак на простатата маркер - простатна кисела фосфатаза. Той се намира в цитоплазмата на ацинарните и дуктален епител на нормалната тъкан се открива в доброкачествена хиперплазия на простатата и аденокарцином. Тези антитела могат да бъдат използвани за откриване на метастатичен рак на простатата, като PSA стои простатата туморни клетки и определят в плазмата на пациенти с рак на простатата.

GCDFP-15 - протеина. която се среща в дифузно кистозна мастит, който се характеризира с макро и микрокисти, дуктален и лобуларен хиперплазия, и др. млечната патология. Кисти, образувани от апокринните секреция от епителни клетки. киста течност съдържа гликопротеини, включително уникален 15 Ша мономер. В нормалната тъкан като протеин се намира в епитела на слъзните, сублингвални и незначително слюнчените жлези, в клетките на серозни мембрани, трахеален и бронхиалните жлези.

GCDFP-15 и PSA едновременно експресира в гръдни тумори, положителни за андроген рецепторите. Този маркер може да се използва за идентифициране на аденокарцином на млечната жлеза, рак на канални слюнчените жлези и апокринните епител.

Част маркери като PSA за рак на простатата, TTF-1 за рак на белия дроб, моноспецифични работа. Друга част от този панел от маркери, характерни за няколко тумори Така, естрогенни рецептори могат да бъдат открити в рак на гърдата или рак на яйчниците, CDX2 - с тумори на стомашно-чревния тракт. Част маркери могат да се характеризират само метастази комплекс източник: естрогенни рецептори и mezotelin характеризират СА125 тумор на яйчниците.

Когато метастатичен плоскоклетъчен карцином на имунохистохимични Проучването е практично, тъй като възможностите на метод не позволява да се уточни вероятният източник на метастази. Това се отнася за метастазите на слабо диференциран невроендокринни рак. Въпреки това, добре диференцирани невроендокринни метастази на рак (синоним - атипични карциноидни) коекспресия на CK7 и TTF1 могат да показват локализация на първичния тумор в белия дроб, и експресиране на СК20 и CDX2 - в храносмилателния тракт.

При пациенти с метастатично заболяване с няма ясни морфологични признаци на жлезите (adenogennoy), невроендокринен и плоскоклетъчен диференциация, основната задача на допълнителни методи на изследване е да се изясни хистогенеза на тумора (по-точно, да се установи посоката на диференциация на туморните клетки). За тази цел се използва следната панел на антитела: p63, СК5, CK14 или СК5 / CK6, CK18, SD56 (N-CAM).

Антитела към протеин P63 на (клонинг 4a4, Dako). P63 протеин р53 принадлежи към семейството на туморните супресорни гени, които също включват протеин Р73. Тези протеини регулират клетъчни процеси на транскрипция и пускови процеси на апоптоза в отговор на увреждане на ДНК и развитие хипоксия. P63 е изразена в ядрата на базалните клетки на епитела на различни видове. P63 протеин открит в пролифериращите клетки на шийката на епител, уротелиума и простатата. Той също така се изразява в най-слабо диференцирани плоскоклетъчен рак. P63 антитела да помогне диференцират доброкачествени и злокачествени тумори на простатата.

Антитела срещу CD56 протеин на (MOS-1 клон, Dako). CD56 е протеин, антиген на естествените клетки убийци. Реагира с CD4 + и CD8 + Т клетки в периферната кръв. CD56 може да бъде открит в невробластома и малко клетъчен рак на белия дроб, както и някои други тумори.

Cytokeratins СК5 / CK6 (клон D6 / 16 В4, Dako). Cytokeratins са семейство междинни нишки и открити в почти всички клетки. Видове cytokeratins СК5 / CK6 открива в мезотелиални клетки и не се откриват в аденокарциноми. СК5 / CK6 използвани като маркери мезотелиом и белодробен рак на сквамозните клетки, болест на Боуен (карцином на видове, които атакува кожни сквамозните клетки на епидермиса, но не и за удължаване на своите базални слоеве). Те не са открити в аденокарцином на белия дроб, но оцветени с мезотелиом и базалните клетки на простатата. Тези антитела не реагират с тъканите на мезодермален произход, като мускулната и съединителната тъкан. Cytokeratins СК5 / CK6 изразява в слабо диференцирани аденокарциноми и идентифицирани в епителоидна мезотелиом.

Цитокератин CK14 (LL002 клон, BioGenex), молекулно тегло 50 кД - е кисела цитокератин първи тип, чрез което е възможно да се направи разграничение стратифицирана плоскоклетъчен епител от прост епител. Цитокератин CK14 равномерно изразена в цитоплазмата на всички клетки на стратифицирана плоскоклетъчен епител keratinizing. Моноклонални антитела за цитокератин CK14 помощ диференцират видовете клетки в млечните жлези по време на развитието на аденокарцином.

Цитокератин CK18 (DC10 клон, Dako) - протеин с молекулно тегло от 45 Ша. Антителата взаимодействат с най-прост епител, включително епитела на тръбите и acini жлези. Този протеин се експресира в епитела на щитовидната жлеза, на гърдата, на стомашно-чревния тракт, и дихателната система. Антитела, използвани за откриване на белодробни аденокарциноми, и те се оцветяват цитоплазмата на туморни клетки с епителиален и не-епителни оцветени туморни клетки (глиом, меланом, остеосаркома).

За диференциална диагноза на високостепенни тумори се използва следния алгоритъм:

1. CK18 (+) - аденокарцином;
2. SK5 / 14 (+) и p63 (+) - плоскоклетъчен карцином;
3. SK5 / CK14 (+), CK18 (+) p63 (+) - perehodnokletochny рак, люспест клетъчен карцином, тимом;
4. CK18 (+), CD56 (+) - рак невроендокринен.
5. При определяне на експресията SK5 / 14, CK18 и p63 perehodnokletochny диференциран рак на сквамозните клетки на в някои случаи е възможно чрез изследване коекспресия SK7 и SK20, което се наблюдава в приблизително 60% от ракова метастаза perehodnokletochnogo.