хистология оборудване

Основните принципи за получаване на състави за светлина и електронна микроскопия, улавяне материал (биопсия, игла удар биопсия, аутопсия). Фиксация, дехидратация, уплътняване съоръжения, подготовка на съкращения в микротом и ultramicrotome. Видове mipreparatov - парче, цитонамазка, печат, кино, смилане. Оцветяване и контрастни средства. Концепцията на хистологичен багрило.

Концепцията на методи хистохимия, авторадиография на живот. Използване имуноцитохимия за експресия идентификация и визуализация молекула в клетки, тъкани и органи. Количествени изследователски методи.

1. Методи за хистологично изследване.

2. Основните принципи и етапите на получаване на хистологични препарати.

Методите, използвани за хистологично изследване:

I интравитална метод на

Интравитална проучвания Целта е да се получи информация за клетъчната активност: движение, разделяне, растеж, диференциация, клетъчно взаимодействие, продължителността на живота, унищожаване, реактивни промени под влиянието на различни фактори.

Изследването на живите клетки и тъкани извън тялото е възможно (ин витро) или в организъм (ин виво).

Изследване на живите клетки и тъкани в култура (ин витро) -

Разграничаване: а) суспензионни култури (клетки, суспендирани в културална среда), б) тъкан, в) на органи, ж) монослой.

метод тъканни култури извън тялото е най-често. Култивирани тъкан може да бъде прозрачен в специални херметично затворени камери. При стерилни условия камерата се поставя капка от културална среда. Най среда растеж е кръвната плазма, към който се прибавя ембрионален екстракт (екстракт от ембрионални тъкани, съдържащи голям брой вещества, които стимулират растежа). Към това се поставя парче орган или тъкан (не повече от 1 mm3), за да се култивира.

Издържат на култивирана тъкан трябва да бъде при телесна температура на тялото, тъканта се приема за тестване. Тъй като хранителната среда бързо става неизползваем (това натрупаната продуктите от разпада на излъчвани култивирана тъкан), след това на всеки 3-5 дни, е необходимо да се промени.

Използвайки метода на култивиране разкрива няколко модели на диференциация, злокачествена трансформация на клетки, взаимодействия между клетки самите, както и вируси и микроби. Култивиране на ембрионални тъкани ни позволи да се изследва развитието на костите, сухожилията, кожата и др.

От особено значение е метод за култивиране на експериментални наблюдения в човешки клетки и тъкани, по-специално, за да се определи пола, злокачествена трансформация, генетични заболявания и други.

1. Основният недостатък на този метод е, че тъканта или органа е изследван отделно от тялото. Без да изпитва неврохуморален влияние на тялото, тя губи своята присъща диференциация.

2. Необходимост от често директно (по време на продължително култивиране).

3. Същите пречупване фактор тъкани.

В. Ин виво изследване на клетки в организъм (ин виво)

1. Наблюдение на структури в живите организми. Пример: с помощта на специален предаване електронна микроскопия, прозорците могат да се видят циркулацията на кръвта в микро кръвоносни съдове.

2.Metod имплантиране прозрачни камери в тялото на животното. обекта за изпитване се поставя в прозрачна камера (оборудвана с микроотворите за метаболизъм) и се имплантира, обикновено в ушната мида на експериментално животно. С помощта на микроскоп може да наблюдава динамиката на промени на клетки и тъкани за дълго време.

3.Metod използват естествени прозрачни камери на експериментално животно, например предната камера, разположена между роговицата и ириса. Този метод се използва за изследване на ранните етапи на развитие на зародиша и и периодичното променя др.

4. Метод на трансплантация - е широко използван за изучаване хематопоеза. кръвни клетки и костен мозък от здрави животни трансплантирани животни са били подложени на леталната радиация. Експериментални животни преживяват поради присаждане на донорни клетки, които са хематопоетични колонии в клетки от далак (метод образуващи колония). Този метод е създаден за разработването на източници на всички кръвни клетки.

Тъй като тъканите в тялото имат приблизително същия коефициент на пречупване, понякога с оглед на тяхната диференциация прибягва до използването на целия живот багрила.

Чрез интравитална багрила включват метилен синьо, трипаново синьо, Конго червено.

Lifetime бои трябва да отговарят на следните изисквания:

1. Бъдете безвредни за организма.

2. бързо се отделя от тялото.

Оцветяване на живи обекти има две разновидности:

1. Vital (интравитална оцветяване) - багрило инжектира в животното, където се свързва селективно към специфични клетки, органели, междуклетъчно вещество ... Например, трипаново синьо или кармин литиев идентифицира фагоцити; Ализарин - новообразуваната костна матрица.

2. supravital боядисване - оцветяване на живите клетки, изолирани от тялото. По този начин, брилянтно крезил синьо багрило разкрива малки червени кръвни клетки (Ретикулоцитните), Янус зелени - митохондриите, неутрални червени - лизозоми.

МЕТОДИ посмъртно II

Основната цел на изследването е методът на следкланичен хистологичен препарат. Лекарството може да бъде:

- инсулт (кръв, костен мозък, слюнка ...)

- печат (далак, черен дроб, тимус, ...)

- филм (перитонеума, плеврата, pial ...)

- смилане (зъби, кости ...)

Най-често използвани тънки оцветени секции затворени от балсам - т.нар постоянен хистологичен препарат.

Получаване на постоянен хистологичен препарат

Основните етапи на получаването на хистологични препарати са както следва:

1. Capture материал.

5. поставяне в запечатване среда.

6. Приготвяне на филийки.

7. Мръсна секции.

8. Дехидратация, избелване и заключение парче в канадския балсам ела или за дългосрочно съхранение.

1. Capture материал за получаване на лекарството от живо тяло (биопсия) или от труп (аутопсия). Темата не трябва да надвишава 1 cm3.

2. фиксиране на продукцията на обект за поддържане на структурата на тъканта или органа, и профилактика на частичен уплътнение от повреди. Като се има предвид гореизложеното, притежателите трябва да отговарят на следните изисквания:

а) не трябва да променят структурата на обекта,

б) необходимостта да се търкаля протеини

в) да е бактерицидно.

Фиксатори разграничават прости и сложни.

Kprostym включва монокомпонентен: формалин (разтвор на формалдехид във вода), алкохол, живачен хлорид и други.

Чрез предизвикателни застопоряващи включва скоби, състояща се от няколко компонента. Например: 1. Zenker-formolovaya смес (сублимират, формалин, калиев дихромат, вода, натриев сулфат). Всеки компонент от тази смес подобрява качеството на друга. Например: живачен хлорид е много добро заключване, но слабо прониква в тъканта; калия, обратно, слаб резе, но и прониква в тъканта. Заедно те се допълват взаимно. 2. Течен Carnoy (алкохол, формалдехид, ледена оцетна киселина). определяне на времето зависи от вида на хонорар, вида и размера на предмета и целите, преследвани от изследователя цели. Тя варира от няколко минути до няколко дни и дори месеци.

3. Измиването се извършва за целите на освобождаване от държача. го произвеждат в течаща вода (до 1 ден).

4. Обезводняване се провежда в алкохоли с увеличаване крепост (60 до 100 градуса) за предотвратяване на тъкан от бързото свиване. 100 градуса се нарича абсолютен алкохол. Абсолютната концентрация алкохол се постига чрез прибавяне към десиканти на 96-алкохол: калцинирания меден сулфат или калциев оксид.

5. поставяне в запечатване среда. След обезводняване продукти за запечатване на обекта в запечатване среда. Такива медии са парафин целоидин.

Включването в парафин. Парафин - твърд - adipocere.

Предварително обект абсолютен етанол се прехвърля в смес от алкохол и всякакви липидни разтворители (ксилен, хлороформ) в съотношение 1: 1 и след това една част от чистите липидни разтворители. Тогава обект се поставя в наситен разтвор на липидни разтворители на парафин с температура на топене от 37 градуса, посочена в хистологични практика snegopodobnoy маса. В това решение, обектът трябва да бъде сведено до 1 ден. След това, обектът за няколко часа последователно прехвърля в 2 порции чист парафин с температура на топене 54-56 градуса (в пещ). След обектът е достатъчно импрегнирани с парафин, блок парафин оформен чрез леене на нетната част парафин обект в специални форми, последвано от бързо охлаждане.

а) изливане на восък позволява да се получат еднакви тънки секции (2-7 микрона);

б) изливане на восък прави възможно да се получи серия от съкращения, че е необходимо за наслояване обект на проучване.

6. Получаване на парчета за получаване на специални устройства - Микротоми. Микротоми се отличават: а) тобоган,

б) шиене (ротационен).

микротом блок Sannomiya още по-силен в obektoderzhatele и микротом нож, преминавайки над него, да правят съкращения. В микротом има Микрометрични свързан obektoderzhatelem. Всяка въртене винт причинява съответното нагоре obektoderzhatelya движение с цел от предварително определено разстояние (предварително определена дебелина на среза).

Шиене микротом противоречие, микротом нож монтирана неподвижно, и с предмет obektoderzhatel подвижно.

Получените парафин секции бяха залепени на предметно стъкло с помощта на яйчен белтък или светлина затопляне, защото дух лампа или във фурна.

7. Мръсна секции. Оцветяване на филийки се извършва за увеличаване на контраста на структурите. За да направите това, вие трябва да депарафинират секции: премахване на восък чрез потапяне пързалки в ксилен, а след това да се отървете от ксилен последователно изплакване в алкохол и вода.

Paint приложен срязване в продължение на няколко минути, след това се промиват с вода. Често използвани оцветяване комбинирано използване на две или повече багрила, оцветители селективно различни конструкции, като хематоксилин (ядро) + еозин (цитоплазмен).

8. Заключение обект за дългосрочно съхранение.

След оцветяване, секциите се промива с вода, с дехидратиран алкохол, алкохолът се отстранява с ксилол, което също прави прозрачните секции. Тогава секции бяха приложени или да падне канадски балсам ела, след което тя е покрита със стъклен капак и изсушава. Тези постоянни хистологичните препарати могат да се съхраняват за дълго време.

Удобства за готвене замразени срези

Нормално хистологичен пълнене трае около 7 дни, но в някои случаи изискват бърз и непосредствен диагноза на наркотици (Cito!). В такива случаи, метод на замразяване. Припадъци, но нефиксирана тъкан замразява в специални камери - Криостат. Използването на вода леден блок образува (аналогов парафин). Камерата е монтирана Криостат микротом, през които са направени замразени секции. При стайна температура, те се размразяват и подходяща за незабавно хистологично оцветяване. Този метод позволява да се направи оценка на структурата на лекарството в рамките на няколко минути - за един час. Въпреки това, методът има основен недостатък: в процеса на замразяване в тъкан, образувана ледени кристали чупене интравитална структура (структура или изкривяване на образа се нарича - артефакт).

Разполага с материали за електронно микроскопско изследване

Особено поради проучвания подмикроскопичните и молекулно ниво. Конвенционалните скоби причиняват необработени коагулацията протеини, които електронен микроскоп ниво (EM) ще доведе до появата на артефакти. Ето защо, при използването на ключалки EM глутаралдехид или осмиев тетраоксид - причинява тънки, меки коагулацията протеини. епоксидна смола се използва като кондензационни медии. Получаване на ултратънки части (нм), произведени на специални устройства ultramicrotome със стъклени или диамантени ножове.

Има няколко класификации на оцветители. По произход багрила са растителен, животински и минерали. Химични свойства - киселинни, основни, неутрални. Най-големите багрила класификация практическо значение за други цели. Според тази класификация, всички бои са разделени в две групи:

Интравитална I (вж. По-горе)

Посмъртен бои са разделени на 2 вида: 1. Обща

1. Obschiekrasiteli от своя страна са разделени на а) ядрен (основен)