Антителата на натриуретичен пептиди probnp

В исторически аспект

През 1988 г., прасе мозъка е изолиран пептид, наречен мозъчен натриуретичен пептид (мозъчен натриуретичен пептид, BNP). По-късно е доказано, че BNP се експресира главно в кардиомиоцитите, така че през последните години все по-често се използва името "натриуретичен пептид B-тип» (В-тип натриуретичен пептид).

Структурирайте натриуретичните пептиди

Аминокиселинната последователност на натриуретичен пептиди vysokogomologichna. Натриуретични пептиди съдържат централна пръстен, съставен от 17 аминокиселинни остатъка (a.k.o.), затворени с дисулфидна връзка между двата цистеинови остатъци и странични вериги с различна дължина. човешки BNP има 32 a.k.o. ANP - 28 a.k.o. За CNP известен две форми, състояща се от 22 и 53 a.k.o. характеризира с дължина N-крайната част. Аминокиселинните последователности в vysokogomologichny пръстен - 11 от 17 аа са идентични за всички три пептиди (Фигура 1.).

Фиг. 1. Аминокиселинната последователност на натриуретични пептиди ANP, BNP и CNP човека. Черният цвят показва аминокиселинни остатъци, които са общи за всичките три пептиди.

Синтез и секреция на BNP

Основната мястото на синтеза на BNP са сърдечни миоцити. BNP иРНК експресия се открива в двете предсърдията и камерите. Въпреки това, се смята, че на лявата камера е основният източник на BNP в организма. Секрецията на BNP в кръвния поток среща като синтеза, само малки количества от синтезира предсърдно BNP съхраняват в секреторни гранули. Това отличава от BNP ANP, за които е показано, че основната част на синтезирания пептид се съхранява под формата на прекурсорни молекули в секреторни гранули.

Нивото на генната експресия и секреция на BNP BNP в кръвния поток значително увеличава в отговор на повишено налягане върху стените на сърдечните камери. Увеличение BNP ниво генна експресия се наблюдава в различни сърдечни заболявания, както и заболявания на белите дробове и бъбречна дисфункция. Въпреки това, най-висока концентрация на BNP в кръвта се срещат при пациенти със сърдечна недостатъчност.

BNP се синтезира като proBNP на прохормон кардиомиоцити, състояща се от 108 a.k.o. (11,905 Da). Образуването на активния хормон настъпва като резултат от специфична proBNP разцепване конвертаза между аа 76 и 77 (фиг. 2). Отцепването proBNP води до образуването на С-краен фрагмент на BNP (32 a.k.o. 3466 Da) и N-терминален фрагмент (N-терминал proBNP, NT-proBNP), състоящ се от 76 a.k.o. (8457 Da). Смята се, че разцепването настъпва proBNP или вътреклетъчно или на повърхността с кардиомиоцитна секреция в кръвния поток. Ензимът, който е отговорен за разграждането на proBNP, няма значително инсталиран. Предполага се, че една от двете convertases (фуринов или Corinne) участва в обработката на proBNP. Двата фрагмента BNP и NT-proBNP секретирани в кръвния поток в еквимоларно съотношение (следователно концентрацията на NT-proBNP в кръвта също се увеличава с увеличаване на нивото на експресия на ген BNP). Смята се, че NT-proBNP не е активен и няма биологична функция.

Фиг. 2. Схема на човешки BNP.

Надеждна е показано, че някои от молекулите не разцепва proBNP в кардиомиоцити и се секретира в кръвта заедно с BNP и proBNP. Освен това, концентрацията proBNP в кръвта няколко пъти концентрацията на активния хормон BNP. Механизмите, които могат да доведат до появата неразцепен proBNP в кръвта причинява високо съотношение proBNP / концентрация BNP в кръвта и стойността на частичен proBNP на обработка за организма активно изследвани.

Физиологичните ефекти на BNP

BNP е антагонист на системата ренин-ангиотензин-алдостерон, чиято активност е повишена при сърдечна недостатъчност на симпатиковата нервна система и. Основните физиологични ефекти на натриуретични пептиди:

инхибиране на натриев реабсорбция в проксималните и дисталните каналчета

увеличаване ендотелен пропускливост

увеличаване натрийуреза и диуреза

релаксация и вазодилатация стени, понижаване на кръвното налягане

увеличи скорост на гломерулна филтрация в бъбреците

инхибиране на кардиомиоцитна хипертрофия и фиброза на сърцето

Фактори, влияещи върху нивото на BNP и NT-proBNP в кръвта

В момента BNP и NT-proBNP се използва широко в клиничната практика като биохимичните маркери на сърдечна недостатъчност.

При здрави индивиди, концентрацията на BNP в кръвта е 10-70 пг / мл, NT-proBNP- 20-300 пг / мл. При сърдечна недостатъчност, концентрация BNP може да се увеличи до 5 нг / мл, NT-proBNP - 100 нг / мл. По-високите концентрации на NT-proBNP в кръвта в сравнение с BNP са свързани с дълъг живот NT-proBNP в кръвния поток.

Въпреки това, нивото на BNP и NT-proBNP в кръвта се повишава, а не само в сърдечна недостатъчност, но и в други патологии, които трябва да бъдат взети предвид при поставянето на диагноза (Таблица 1).

Нивото на BNP и NT-proBNP в кръвта зависи от пола (по-висок при жените, отколкото при мъжете) и възрастта. Нива на двете маркери в кръвта се увеличава с възрастта на пациента. В тази връзка, беше предложено да се използват различни прагови стойности в зависимост от пола и (или) възрастта на пациента. Така фирма Roche на препоръчва използването на различни прагове NT-proBNP концентрация при пациенти на възраст под 75 години (125 пг / мл) и на възраст над 75 години (450 пг / мл). В същото време, се препоръчва да се използва един праг ниво 100 пг / мл за всички пациенти в методи за определяне на БНП.

нивото на хемоглобина и телесно тегло, тъй като концентрацията на BNP и NT-proBNP в кръвта се отрази. Концентрацията на двата пептида в кръвта се увеличава с анемия. При пациенти с висок индекс на телесна маса (повече от 25 кг / м 2) концентрация BNP и NT-proBNP значително по-ниски, отколкото тези с пациенти с нормално тегло.

Методи за определяне на BNP и NT-proBNP в кръвта

Съвременните методи за количествено определяне на BNP и NT-proBNP в кръвта се основават на метода от тип сандвич имуноанализ. Методът дава възможност да се постигне висока чувствителност, което е изключително важно, имайки предвид ниските нива на BNP и NT-proBNP в кръвта на здрави хора. Чувствителността на съществуващите методи за определяне на BNP е 1-10 пг / мл, NT-proBNP - 5-15 пг / мл.

Методите, използвани за определяне BNP двойка моноклонални антитела, или комбинация от моно- и поликлонални антитела (Таблица 2). Например, едно от антителата, използвани е специфичен за структурата на пръстена, а другият към С-края или N-края на пептида. Тъй натриуретични пептиди, характеризиращи се с висока степен на хомоложност да се създаде диагностични системи са избрани антитяло не притежава кръстосана реакция с ANP и CNP. Използването на антитела с различна специфичност на епитопа както и разликите в калибраторите доведе до факта, че измерването на BNP в една и съща проба, получена с помощта на различни методи могат да се различават.

* И двете Triage и Beckman системи използват същото антитяло, но не са едни и същи, защото има разлики в подходите за използване на моноклонални и поликлонални антитела, както детекторни антитела и субстрат антитела.

Фактори, влияещи на определяне на концентрациите на BNP и NT-proBNP

Гликолизирането molekulNT-proBNP. В централната част на молекулата е гликозилиран NT-proBNP. Гликозилирането влияе неблагоприятно върху измерването на NT-proBNP концентрации в кръвта, тъй като въглехидратни остатъци пречат на взаимодействието на антитела с NT-proBNP. Епитопите използвани в диагностични системи сайтове на гликозилиране на антитела са разположени в близост молекулата NT-proBNP (точки 39-50 и 42-46). Това води до факта, че концентрацията на NT-proBNP в пробите сериозни (понякога няколко пъти) се подценява. Нивото на NT-proBNP гликозилиране се различава при пациенти, така че грешката на метода не е постоянен. Клиничното значение на това не е установен, обект на разследването.

Стабилността на BNP и NT-proBNP в пробите

За да се определи нивото на BNP е само EDTA плазма или цяла кръв се събира в епруветки, съдържащи EDTA (TriageBNP). Концентрацията на BNP, определена в серумни проби, хепарин и цитрат плазма е много по-ниска от концентрацията, определена в EDTA плазма.

Инвитро BNP стабилност се различава за различните методи (в зависимост от епитопите на антитялото). Плазмата беше предназначен за измерване на концентрацията на BNP, да се съхранява при 0-4 ° С и се извършва измерване на концентрация бързо. Като цяло, BNP е стабилен в продължение на 4 часа съхранение при стайна температура и 8 часа при 4 ° С в проби от цялата кръв, съдържаща EDTA.

серум, хепарин и EDTA плазма може да се използва за измерване на концентрацията на NT-proBNP. NT-proBNP в серума е стабилен в продължение на 72 часа инкубиране при стайна температура.

BNP и NT-proBNP като биохимичните маркери на сърдечна недостатъчност

Сложността на диагнозата за сърдечна недостатъчност е неспецифични симптоми (диспнея, умора, оток), които могат да бъдат предизвикани от други заболявания, или резултат от затлъстяване или лошо физическо състояние на пациентите. Многобройни проучвания потвърждават ефективността на използването на BNP и NT-proBNP на пациенти с остра и хронична сърдечна недостатъчност. Въпреки това, трябва да се разбира, че за двете маркери, характерни за висока чувствителност, но ниска специфичност по отношение на определянето на сърдечна недостатъчност. Ниска специфичност се дължи на факта, че нивата на двете маркери могат да бъдат увеличени в други заболявания. Следователно, измерването на концентрацията на BNP (NT-proBNP) трябва да се използва като основен диагностичен тест. Ако концентрацията на BNP (NT-proBNP) в кръвта под нивото на прага, сърдечната недостатъчност може да бъде отстранена с висока вероятност

98%. В този случай, ако концентрацията на BNP (NT-proBNP) се увеличава, провеждането на ехокардиография се изисква да потвърди наличието на лява вентрикуларна дисфункция. По този начин, измерването на концентрацията на BNP (NT-proBNP) може да намали групата пациенти, които изискват притежаващи ехокардиография. В случай на остра сърдечна недостатъчност, измерване на концентрацията на BNP (NT-proBNP) прави по-лесно да се установи точната диагноза и да започне лечение. По този начин, BNP (NT-proBNP) не се използват за диагностика на сърдечна недостатъчност, както и да го изключва при пациенти с тежки симптоми. В момента на измерването на концентрацията на BNP (NT-proBNP) в допълнение към клиничен преглед, ехокардиография, ЕКГ и рентгенография на гръден кош се препоръчва от Европейското дружество по кардиология за диагностика на сърдечна недостатъчност и левокамерна дисфункция.