техники за отглеждане анаероби - studopediya

За култивирането на анаеробни бактерии е необходимо да се намали редокси потенциала на околната среда, за да се създадат условия на анаеробиоза, т. Е. Ниско съдържание на кислород в средата и неговата среда. Това се постига чрез използване на физически, химически и биологични методи.

Физични методи.

Въз основа на култивиране на микроорганизмите в безвъздушна среда, се постига:

1) посев в среда, съдържаща редуктори и лесно окисляващи вещества;

2) дълбочината на засяване микроорганизми в твърда хранителна среда;

3) механично отстраняване на въздуха от съдовете, в които се отглеждат анаеробни микроорганизми;

4) заместване на въздуха в съдовете на всеки безразличен газ.

Както намаляване вещества обикновено се използват парчета (около 0,5 г) от животински или растителни тъкани (черен дроб, мозъка, бъбреците, далака, кръв, картофи, памук). Тези тъкани свързват кислород разтваря в средата и се адсорбира бактерии. За да се намали съдържанието на кислород в хранителната среда преди сеитба се кипи в продължение на 10-15 минути, след това бързо се охлажда и се излива върху малко количество стерилен вазелин масло. Височината на слоя на масло в тръбата на около 1 см.

Както лесно окисляващи вещества използват глюкоза. лактоза и натриев формиат.

Най-хранителна среда течност с редуциращи вещества е среда коте Tarotstsi който се използва предимно за натрупване на анаероби време на първоначалното посяване на изпитвания материал и за подпомагане растежа на анаеробни изолира чиста култура.

дълбочината на засяване микроорганизми в плътни носители, произведени чрез процеса Vignal-Veyona който се състои в механично защитна култури срещу анаероби въздух кислород. Обърнете стъклена епруветка 30 см дължина и 3-6 мм в диаметър. Единият край на тръбата се вкарва в капиляра в пастьорова пипета, и в другия край направи свиване. Останалата част от широкия край на тръбата се вкарва в тампон от памук.

Епруветките с разтопен и се охлажда до 50 ° С Хранителен агар плочи посяват с изпитваното вещество. След nasasyvayut агар посяват в стерилни епруветки Vignal-Veyona. Капилярна тръба край за запечатани в тръбата на горелката пламък и се поставя в инкубатор. Това създава благоприятни условия за растежа на най-строги анаероби. За изолиране на единични колонии тръба врязани файл, асептично, в ниво колонии, прекъсване, и улавяне колония стерилна линия и се прехвърля в епруветка с хранителна среда, за по-нататъшен растеж и проучване в чиста форма.

Отстраняване на въздуха се произвежда от неговата механична изпомпване на специални устройства - анаеробно, които са поставени в чаши с сеитба анаеробни бактерии. Подвижно Анаеробна е дебелостенна метален цилиндър с добре запушалка капачка (с гумена облицовка), снабдена с вакуум габарит и превключвател кран. След поставяне на инокулираните пластини или тръби на анаеробни въздушния отстранява чрез вакуумна помпа.

Замяна въздух безразличен газ (азот. Водород. Аргон. Въглероден диоксид) може да се извърши по същия анаеробни чрез изместване от газов цилиндър.

Химични методи.

Въз основа на абсорбция на атмосферен кислород в запечатан съд (anaero членове, ексикатор) вещества като пирогалол или натриев хидросулфит Na2 S204.

Биологични методи.

Въз основа на съвместно отглеждане на строги анаероби, аероби. За тази агар от чаша замразени диаметър изрязва с ширина стерилен скалпел лента агар на около 1 см. Две превръща в един агар полу-диск. От едната страна на агарова плоча засява с аеробни, често се използва например S. Aureus или Serratia marcescens. От другата страна на инокулираната анаеробно. Ръбовете на плочите са запечатани с пластелин или излива разтопено парафин и се поставят в инкубатор. В присъствието на подходящи условия в чашата ще се размножават аероби. В края на краищата на кислород в пространството на чашата се използва за стартиране на растежа на анаеробни бактерии (3-4 дни). За да се намали въздушното пространство в чашата се излива в културалната среда може по-дебел.

Комбинирани методи.

Въз основа на комбинация от физически, химически и биологични методи за създаване на анаеробно.

Видове и механизми на бактериална храна.

Видове храна.

Микроорганизмите се нуждаят от въглехидрати. азот, сяра, фосфор. калий и други елементи. В зависимост от въглеродния източник за доставка на бактериите са разделени в autotrophs. използван за конструиране на тяхната клетъчна С02 въглероден диоксид и други неорганични съединения и heterotrophs. хранене поради готови органични съединения. Бактериите са автотрофни нитрифициращи бактерии в почвата; серни бактерии, които живеят във вода със сероводород; железни бактерии, живеещи във вода с железен желязо и др.

Heterotrophs. Изхвърлете органичните останки на мъртвите организми в околната среда, които се наричат ​​сапрофити. Heterotrophs, които причиняват заболявания при хора или животни, посочени като инфлуенца и условно патогенни. Сред патогени намерени облигатен и факултативни паразити (от гръцката parasitos -. Паразитни). Задължителни паразити могат да съществуват в клетките, например Rickettsia. вируси и протозои.

В зависимост от субстрата окисляем. наречен донор на електрони или водород, микроорганизми са разделени в две групи. Микроорганизми използват като водородни донори неорганични съединения, наречени lithotrophic (от гръцката Lithos -. Rock) и микроорганизми, като се използва водород като донор органично съединение, - organotrophs.

Като се има предвид източника на енергия. phototrophs разграничение между бактерии, т.е. фотосинтетичния (например, синьо-зелени водорасли, които използват енергията на светлина) и chemotroph изисква химически източници на енергия.

Механизми на властта.

Доставка на вещества в бактериалната клетка, зависи от размера на молекулите и тяхната разтворимост в липиди или вода, рН на средата. концентрацията на вещества от различни фактори и мембранната пропускливост др. Cell стена преминава малки молекули и йони, забавящи макромолекула маса по-голяма от 600 Г. основен регулатор вещества в клетката е цитоплазмената мембрана. Тя може да бъде грубо разделени в четири хранителни вещества проникване механизъм в бактериалната клетка. проста дифузия, улеснена дифузия, активен транспорт, транслокация групи.

Най-прости вещества в механизма на клетката - проста дифузия. в която изместване вещества се дължи на разликата на тяхната концентрация от двете страни на цитоплазмената мембрана. Веществата преминават през липид-Ing част на цитоплазмената мембрана (органични молекули, лекарства), и по-рядко, пълни с вода канали в цитоплазмената мембрана. Пасивна дифузия става без разходи за енергия.

Улеснена дифузия се появява в резултат на разликите в концентрацията на вещества от двете страни на цитоплазмената мембрана. Въпреки това, този процес се извършва с помощта на носещи молекули локализирани в цитоплазмената мембрана и притежават специфичност. Всеки носител пренася веществото през мембраната или друг компонент изпраща цитоплазмената мембрана - действителната транспортер. Carrier протеини могат да бъдат пермеаза, място, което синтеза - цитоплазмената мембрана. Улеснена дифузия става без разход на енергия, веществата са преместени от по-висока към по-ниска концентрация.

Активен транспорт се осъществява чрез permeases и има за цел прехвърлянето на вещества от ниска концентрация към по-голяма, т.е. като срещу потока, така че разходите на процес е придружен от метаболитна енергия (АТР), генерирани в резултат на редокси реакции в клетката.

Прехвърляне (транслокация) групи, подобни на активния транспорт, различаващи се с това, че се намесва молекула е модифицирана в процеса на прехвърляне, например фосфорилиран.

Добив вещества от клетката се осъществява чрез дифузия и участие на транспортни системи.

Основните принципи на култивиране на бактерии.

А универсален инструмент за производство на култури е бактериална линия. Освен нея, за посев употреба убождане специална бактериална игла, както и за култури на блюда на Петри - изработени от стъкло или метална шпатула. За култури течни материали, заедно с една линия и оценява с помощта на Pasteur пипета. Първият предварително направени от разтопими стерилни стъклени тръби, които се изтеглят на пламъка като капиляри. В края на капиляра веднага запечатани да поддържа стерилност. В пипети Пастьор и е завършил широк край запушени с памук, след което те се поставят в специални кутии, или го увийте в хартия и се стерилизира.

Чрез субкултивиране тръба бактериална култура, взето в лявата и дясната притиснал памук щепсел IV и V пръстите, отстранява това, провеждане над пламъка на горелката. Задръжте останалите пръсти на една и съща ръка контур спечелят неговото потомство, след което запушалката затворената тръба. След тръба с наклонен агар като линия с семенен материал, това намаляване до кондензат в долната част на средата, и зигзаг движение разпределя мате риал на конусния повърхността на агар. Сваляне на линия, изгори край на тръбата и го затваря с предпазител. Loop стерилизирани в пламъка на горелка и се слага в статив. Епруветки с култури записващи, като посочва датата и естеството на семената на културите (броя проучване или името на културата).

Култури "трева" произвеждат шпатула на среда хранителен агар в петриево блюдо. За тази цел отваряне на капака лявата ръка, или контур пипетира инокулум се прилага върху повърхността на хранителен агар. след Лопатка извършва чрез пламъка на горелката, охлажда се от вътрешната страна на капака и се стрива материал по повърхността на средата. След инкубиране, засяване появява еднакво непрекъснат растеж на бактерии.

Изкуствен хранителни среди, тяхната класификация. Изисквания към средата.

На хранителна среда в микробиологията наречен среда, съдържаща различни съединение състав комплекс или прост, които се прилагат за бактерии или други микроорганизми в лаборатория или индустриална среда.

Хранителна среда се получават от продукти от животински или растителен произход. От голямо значение е наличието в културална среда растежни фактори, които катализират метаболитните процеси на бактериалната клетка (витамин В, никотинова киселина и др.).

Изкуствен среда получава съгласно някои рецепти на различни инфузии или отвари от животински или растителен произход с добавяне на неорганични соли, въглехидрати и азотни съединения.

В бактериологично практика най-често използваната сухи хранителни среди, които са базирани на постиженията на съвременните биотехнологии. За тяхното получаване се използва икономически жизнеспособни нехранителни суровини: загубата на срока на годност на кръвни продукти (gidrolizina - киселина хидролизат от животинска кръв, aminopeptid - ензимен хидролизат на кръвни продукти на биотехнологията (храна фуражни дрожди лизин, гроздова прах, belkolizin) Сухи хранителна среда могат да се съхраняват за дълъг период от време. време, лесен за транспортиране и има относително стандартен състав.

Консистенцията на културалната среда може да бъде течна, полутечна, дебелина. Твърди носители се получава чрез добавяне към течната среда на 1,5-2% агар, полу - 0.3-0.7% агар. Агар е продукт на определен вид водорасли, се топи при температура 80-86 ° С, се втвърдява при около 40 ° С в замразено състояние и се свързва със средна плътност. В някои случаи, желатин (10-15%) се използва за твърди носители култура. Редица естествена културна среда (серум сплескани, сгънати яйчен белтък) в себе си са плътни.

Предназначението на средата се разделя на сърцевина, избираем и диференциална диагноза.

Основният проблем на средата, използвана за отглеждане на много бактерии. Това Триптични храносмилане на месо, рибни продукти, казеин или животинска кръв. използван за получаване на течна среда - гъста и хранителен бульон - хранителен агар. Такива среди са основа за получаване на комплекс културална среда - захар, кръв и други патогенни бактерии отговарят хранителни нужди ..

Избираем медийна култура предназначен за селективно отделяне и събиране на специфични видове микроорганизми (или специфична група) от материали, съдържащи различни външни микрофлора. При създаването на избираем хранителни среди са базирани на биологични характеристики, които отличават микроорганизмите от повечето други. Например, селективно растежа на стафилококи се наблюдава при високи концентрации на натриев хлорид, Vibrio холерният - при алкални условия и др ...

Диференциална диагностични хранителна среда, използвана за разграничаване на някои видове (или групи) микроорганизми. Принципът на изграждане на тези среди се основава на факта, че различните видове бактерии се различават в тяхната биохимична активност поради неравномерното набор от ензими.

Специална група от синтетични и полусинтетични хранителни среди. Съставът на синтетични носители са химически чисто вещество: аминокиселини, минерални соли, въглехидрати и витамини. В полусинтетичен среда допълнително да включва пептон, дрождев екстракт и други хранителни вещества. Тези среди често се използват в научните изследвания и в микробиологичната промишленост при производството на антибиотици, ваксини и други лекарства.

През последните години, за да се спаси медийната култура и ускорено идентифицирането на някои микроорганизми (ентеробактерии, Staphylococcus, Streptococcus и др.) Се прилагат т.нар Microtest система (МТС). Те представляват полистиренова плака с ямки, които съдържат стерилен диференциална диагностика среда. Стерилизация MTS изпълнявани от UV облъчване. Microtest системи са особено подходящи за масовите бактериологични изследвания в практически лаборатории.