Определяне на ензимна активност - studopediya

Оценка на ензимната реакция се оценява чрез стриване или скоростта на субстрат, или скорост на образуване на продукт. Една единица активност на всеки ензим (Е) получаване на количеството ензим, който катализира превръщането на оптимални условия 1mkmolya субстрат в 1 мин. Има и друга специфична единица дейност:

1 катал - брой Е, който катализира превръщането на 1 мол субстрат в 1 сек.

E 1 = 16.67 nkatal на ензима.

За изразяване на активността на ензима се използва и за определяне на специфична молекулна активност. Специфична активност - брой E fermenttivnoy активност преброяване на 1 mg протеин. Колкото по-висока stepenb ензим пречистване, по-висока специфична активност. Броят на оборотите на ензим (молекулярна активност) - броят на субстратните молекули взаимодейства с една молекула ензим в 1 минута. Броят на оборотите варира в широки граници, например:

1) Karbongidraza (катализира трансфера на Н2 CO3) изпълнява 36000000 навивки / мин

3) фосфоглюкомутаза - 1240 об / мин

За качествено откриване и количествено определяне на активността на сложни ензими използват следните методи:

Над * Н2 абсорбира светлината. PVK на радиация може да се види на НАД * H2. Лактат от една молекула една молекула, образувана NAD * Н2.

НАД * H2 флуоресцира интензивно. Интензитетът на флуоресценция е пропорционален на концентрацията.

10 локализацията на ензима в клетките, и органна-MARKORNYE ензими.

Всички ензими и процеси metabolieskie разделни отделения (отделен и изолирани). В една нормална клетка е около 1000 ензими. Подреден ензим взаимодействие се постига чрез многостепенно регулиране и раздробяване. Познаването на локализацията на ензими в клетката и определяне на тяхната активност в кръвта, е възможно да се прецени степента на разрушаване на тъканите.

Ядрото: локализиран РНК - полимераза NAD - синтаза, ензими, участващи в ДНК репликацията.

Митохондриите: ензими тъкан дишане, окислителното фосфорилиране, в ензимите на окислението на мастни киселини, цикъла на Кребс, синтеза на карбамид.

Лизозоми: хидролитични ензими с рН оптимум в област 5 (пептиди, естеразата).

Рибозомите: протеин синтез ензими.

EPS: липидни синтез ензими, хидроксилиране ензими детоксикация ензими (метилен -

регламент, ацетилиране), спрежение.

Мембранен: Na К -ATPase, аденилил циклаза, ензим, субстрат транспорт.

Цитоплазма: гликолитични ензими, активиране на аминокиселини, мастни киселини синтез.

Мултиен системи са локализирани в структурата на органел, така че всеки ензим се намира в непосредствена близост до следващия ензим на реакционната последователност. Благодарение също раздробяване на клетката може да се случи едновременно две несъвместими процес: окисление на мастни киселини на митохондриите и синтез на мастна киселина в цитоплазмата).