Лабораторна диагностика на кампилобактериоза

В зависимост от формата и локализацията на кампилобактериоза снимки метод за изследване са кръв, цереброспинална течност, изпражнения, повръщане и т.н. Campylobacter зле понасят транспортиране. За транспортиране на пробите, използвани в лаборатория транспортна среда бактериологично Cary-Blair, стерилна среда за контрол на рН 8.5 или алкална пептонова вода.

На доставените материал подготви петна върху предметни стъкла и се оцветяват с Грам. В присъствието на Campylobacter в проба за откриване на Грам намазка тънки спираловидно извити пръчки S- и С-образни дължина 0.5-8.0 микрона, които често са свързани в къси вериги в "крило на чайка плаващ". За бързо диагностициране на чревната индикативна кампилобактериоза фиксирана тънка намазка на фекални пламъка в продължение на 10-20 секунди. оцветени с основния фуксин воден разтвор и се промива с вода. В такъв кратък период от време голяма част от това в клеветническа придружаващ микрофлора не разполага с време, за да рисувам, а Campylobacter могат лесно да бъдат идентифицирани с характерна морфология.

Campylobacter растат при концентрация на кислород в атмосфера от 5 до 17% газ. Посяване на изпитвания материал до получаване на гъста хранителна среда, получен на базата на еритритол агар, който, след охлаждане до 45-50 ° С се прибавя 5% овча кръв и хемолизирани реагенти за повишаване aerotolerant микроорганизми (натриев пируват, железен сулфат и натриев метабисулфит).

За освобождаване от придружаващите микрофлора използват два метода. Първият метод се състои в прибавяне към средата на културата смес от антимикробни агенти (полимиксин, rifamapitsin, амфотерицин В, и ristomntsin fuzidin-), което позволява на възбудител да разпредели асоциация на микроорганизми. Вторият метод се основава на способността на Campylobacter да преминат през филтри с диаметър на порите от 0.5-0.6 микрона, докато по-голямата част от съпътстващите флора чрез филтруване забавено. Стерилни филтри мембраната се поставят върху повърхността на шоколад агар или кръв се прилага към тях и няколко капки 10% от материал суспензия. След 30 минути, филтрира се отстранява, поставени чаша с култури в анаеробни или ексикатор и се култивира при 42 ° С

За да се създаде микроаерофилни условия на култивиране, използващи газовата среда със следния състав: 5% кислород, 10% въглероден диоксид и 85% азот. При липса на оптимално газовата смес се използва "съд с свещ. В някои случаи е възможно да се използват за генериране на газ пакети, принципът на действие се основава на каталитично усвояване на кислород в затвореното пространство (анаеробни и др.) До концентрация от 5.7% и образуването на въглероден диоксид чрез химически средства.

След 2-4 дни. инкубиране на твърди хранителни среди растат колонии от два вида. колонии растат на прясно приготвена хранителна среда апартамента, мокро, лъскава, с тенденция за пълзящи наподобяващи растеж разпространява капки кондензация. При намаляване на влажността в хранителни среди по време на съхранение за плътни носители растат колонии от втори тип: плътен, изпъкнала, полупрозрачна, negemoliticheskne, 1-2 mm в диаметър, е трудно различим от колонии замърсяващи микрофлора. При наличие на достатъчно количество от чиста култура на петна на патогени приготвят и се оцветяват с оцветяване по Грам, определени от мобилността на микроорганизми "смачкани" капка тестове дават каталаза, оксидаза, натриев хипурат хидролиза и определяне на чувствителност към налидиксова киселина. В присъствието на малко количество от Campylobacter колонии, изолирани колонии с отличителни свойства преминават от култура за натрупване в твърда хранителна среда, и се отглеждат в микроаерофилни условия в продължение на 48 часа.

След получаване на чиста култура на патогена получаване тестове над и получаване на окончателното определяне на изолирани микроорганизми

Антигенен структура Campylobacter сложна структура особено термолабилни Аг. Основна повърхност Ag представени липополизахарид (O-Ag) и kislotoratvorimymi протеинови фракции, които играят водеща роля в серотипа. Общо Ag отсъства Enterobacteriaceae. Идентифицирани флагеларно H-Аг. В отговор на тези Аг Campylobacter антитела се появяват в кръвта по време на ранните периоди (на ден 5 от титър заболяване антитяло толкова висока, колкото 1 :. 5000) и се съхранява в него за дълго време след заболяването.

Серологични изследвания играе важна роля, особено в големи епидемиологични проучвания. Диагнозата на отделните случаи, ролята му е малък. RA е поставен с autostrains или жив музей култура, по-точни резултати се получават с формалин култура. Значително титър в RA - 1: 8-1: 32 се появява на втората седмица. DGC е спецификата на видовете животни, като това налага използването на специални видове антиген. Най-чувствителните са РИФ и IFM, тези системи са разработени в чужбина и в Русия, експериментални партиди за IHA.

Лабораторна диагностика на Salmonella гастроентерит.

Основни патогени: S. Typhimurium, S. Хайделберг, S. enterica, S. Derby и т.н.

Основният причинител на салмонелоза S. enterica се превърна през последните години. Вижте S.enterica има 7 подвида S.choleraesuis, S.salamae, S.arizonae, S.diarizonae, S.houtenae, S.bougori, S.indica.

а. В изпражненията изследвани от ранните дни на заболяването и до освобождаване на пациента от ctatsionara: първия път - преди началото на антибиотична терапия, впоследствие - след приключването (не по-рано от 48 часа). Вероятност изолиране на Salmonella от изпражнения големите в един седмица заболяване, 2 и 3 седмици, тя се намалява в 2-6,7 пъти съответно. Когато формата на стомашно-чревния патоген изолира най-благоприятно от изпражненията 1 седмица. При патологични примеси в изпражненията (слуз, кръв и т.н.) gnoi нея включват се взема проба.

б. Повърня и стомашни промивки, са взети до обем от 100 ml. За да се изследва първите части с помощта на промиване вода, получена без използването на дезинфектанти. В кисела рН повърнатото преди засяването им се неутрализира с 10% разтвор на натриев бикарбонат промивки бяха центрофугирани за 15 минути при 3000 об / мин и утайката се използва по-нататък. В случай на повреда центрофугиране позволи посяване нативния материал.

инча Жлъчните (дванадесетопръстника съдържание) се разтваря в стерилни флакони. Така събират отделно дванадесетопръстника съдържание, кистозна жлъчката и жлъчни от жлъчните пътища (части А, В и С). Киселата среда, белезникав оттенък, люспи правят материала неподходящи за бактериологично изследване.

Урината е. Взети след задълбочен тоалетна външни полови органи; първата част се отстранява и остатъка в размер на 20-30 мл се събира в стерилен контейнер. Урината се центрофугира в продължение на 15 мин при 3000 об / мин, за изследвания, използващи утайка. Въпреки това, засяване и да позволи на родния материал. Тъй като най-високата честота на Salmonella открит в урината на 2-3 седмици на заболяване.

Разглеждане с менингеална или meningoencephalitic синдром. Проба (3,5 мл) се поставя в стерилна епруветка и се доставя, лаборатория, предотвратяване материал от замръзване (термос бутилка може да се използва). К. Допълнителни материали за изследване - биопсии на костен мозък (0,5-0,75 мл обогатяване средни инокулира върху), храчки (гнойни бучки инокулират върху средата и Ploskireva НС), розеола (фрезоване, 1-2 капки прилагат жлъчния бульон изсмуква и се засява на жлъчен бульон), мляко на кърмачки. Ако е необходимо (за хирургични интервенции, или смърт) за изследването и избрания работен сечение материал. тегло на пробата трябва да бъде най-малко 20 грам.

Ограда натривки от оборудването и други обекти на околната среда се осъществява със стерилна памук или памучен марля. Непосредствено преди като тампон напоен промиване обогатяване среда (буферирана пептонна вода рН 7.0), огъване на тръбата; прокара излишната влага от страна на тръбата. Намазки, взети от площ не по-малка от 100 cm2, ако няма специални указания за обекта. При вземането на секрет от слонова кост Един тампон се използва за проучване на 10 яйца.

2. Сеитбата на хранителни среди

а. Околна среда. Като носители се използват selenitovy обогатяване бульон и магнезиев aminopeptidom selenitovuyu среда tetrationatovy бульон Mueller среда Kauffman 20% жлъчна бульон. Сред диференциално-диагностичен медиите за материала на основната култура и засяването с обогатяване медии секретират висока селективност (например, бисмут сулфит агар или агар блестящ зелен) sredneselektivnye (Ploskireva среда слабо алкална хранителен агар) и nizkoselektivnye (агар Ендо и Левин>. На медии за първична идентификация (агар Kligler, комбинирана среда съгласно Olkenitskomu, средно Ръсел) определя лактоза ферментация (в среда Olkenitskogo - и захароза), глюкоза, както и способността да се образува сероводород газ, г idroliz карбамид. За биохимична идентификация се използва среда с карбамид от Christensen, среда с карбамид от Preuss, средно Кларк, среда с въглехидрати среда за определяне indoloobrazovaniya, средата с аминокиселини (лизин, орнитин, аргинин), глицерол-пурпурно бульон Stern и полутвърди агар за определяне на мобилността.

б. Съмнителни колонии (поне три) субкултивират в епруветки с скосен или комбинирана среда (Olkenitskogo, Kligler, Ръсел). В случай на поява на съмнителни колонии (паралелно с каналите на комбинирана среда), проведени на МРА засяване за последващи продукции аглутинация реакция. Резултатите от тази реакция да бъде потвърдена в биохимични стъпка идентификация е завършена. В същото време проучване на морфология и багрилни свойства на бактерии, получаване на петна и оцветяване тях грам. При липса на предполагаеми колонии чаши с бисмут сулфит агар е останало във фурната за още 24 часа, след което сканирането и разкриване на съмнителни колонии продължават да учат. В противен случай, работа с култури спря. Патоген paratyphi В може да се получи мазен твърдо вещество растеж или valoobrazovaniya явление (образуване на мазен колонии върху периферията на ролката).

инча За по-нататъшна работа избрани колонии ureazaotritsatelnyh бактерии, ферментиране на глюкоза и захароза nonfermenting образуване Н2 S. Културите със средна Olkenitskogo посяват отново в среда с Хис манитол, 1% пептон вода за определяне на индол и в полутвърда агар за определяне на мобилността. При разпределяне на култури с ензимни свойства, характерни за Salmonella, проучване антигенна структура в реакция на аглутинация върху стъкло с О - и Н-аглутинация антисеруми диагностика и определят биоварианти. Според резултатите от реакционната аглутинация постави краен бактериологично диагностиката и изследването се прекратява.

През последните широко диференциално селективен ксилоза-лизин-deoksiholatnye (XLD-агар) среда за Salmonella и Shigella (SS-агар); които са израснали на колониите на Salmonella са червени с черен център (поради образуването на Н2 S). Въпреки това, тези медии не са по-селективни от бисмут сулфит агар или Зеленка.

3. Серологични изследвания бяха проведени за диагностика, както и за идентифициране и разграничаване на различните форми на носител.

Лабораторна диагностика на Yersinia инфекция.

Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica патогенен за различни животински и понякога за човека, причинява мезентериална лимфаденит, хронична диария и тежка септицемия

Най-добри резултати, потвърждаващи диагнозата, да получат освобождаването на Yersinia на патологичен материал. Тези бактериологични изследвания са еднакво важни за диференциалната диагноза на заболявания, свързани с повишена температура, лимфаденопатия и ентероколит.

Материал - кръв, изпражнения, храна, вода. Материал се посява върху средата Ендо Ploskireva, най-оптимална среда за Y. enterocolitica - агар цефсулодин, irgazanom и новобиоцин и MacConkey агар. Твърди носители колония на Y. enterocolitica са малки, лъскава, често изпъкнали синкав при преминаваща светлина. Когато култивиране (48 часа при 37 ° С) в среда Endo колонии са розов оттенък. Полиморфизъм е слаби колонии. С остаряването, Y. enterocolitica често отбеляза ръст за източване.

Y. pseudotuberculosis колонии отличават сиво-жълтеникав оттенък при преминаваща светлина и по-малко прозрачност. Когато култивиране (48 часа при 37 ° С) колония върху среда Ендо Y. pseudotuberculosis остане безцветна. Често образуват R-форма - изпъкнала, груб, печени зона с (или без), наподобяващ Y.pestis колония.

Всички щамове на Y. enterocolitica имат повърхност Аг ентеробактериите, общо с други членове на семейството. Според О-антиген на всички видове са разделени на 34 серовар. От пациентите често отделят O3 и O9 серотипа, най-малко - О6, О7, O8, О5.

Патоген За pseudotuberculosis антиген се отделя от 8 серогрупи (I-VIII) в 20 О-факторен антигени. Чрез О-антиген и Н антиген от този вид podrazdelyabt 13 серотипа и podserovarov (la, Ib, Па, ПЬ Пс, III, IVa, IVb, Va, Vb, VI, VII, VIII. От пациентите често щамове, принадлежащи да серовар Ib, III и IV.

Крайният типизирането се провежда при използване аглутинация серуми: За Y. enterocolitica - О; за Y.pseudotuberculosis - О и N. антителата в серума на пациенти с RA са определени при определяне на разгъната или ЗНЗ. Диагностика титър TPHA - 1: 400 и по-висока.