Изготвяне на части от парафинови блокчета - на базата на хистологията

Страница 42 от 68

Залепени дървен блок парафин блок е твърдо фиксиран в микротом на скоба чрез поставяне на дълга ос, успоредна dlinniku микротом. След това, чрез задаване на желания ъгъл на рязане и правилен ъгъл на наклона на ножа, той е твърдо фиксирана винтови клеми и е разположен над уреда.

Фигура 74.
Техника на рязане парафинови блокчета.

След това, регулиращ винт фидер уредът е настроен така, че горната част на своя самолет е бил в хоризонтално положение и не се достигне ножа 0,5-1 мм. Когато предварително напасване към блока на ножа е завършен е настроен микрометрично мащаб за дебели секции (25-30 микрона) и нож движение шейна започне дозиране единица нагоре с него, докато първите пълни раздели. След получаване на симулация блок: се реже със скалпел излишък парафин, оставяйки актьорския около обекта слой е не повече от 3.2 mm, и приложете единица правоъгълна форма. След микрометрични мащаб довежда до желаната дебелина парче и се пристъпи към окончателно отрязване материал.
Трябва да се помни, че движението на нож слайда по пистата трябва да се направи плавно и без излишно усилие. Невъзможно е да натисне надолу горната част на дръжката, тъй като това води до изместване на масления слой, разположен между плъзгащите се повърхности, и понижаване на острието, като секциите не са гладки. Микротомни движение нож по време на преминаването на устройството трябва да се извършва бързо.
Проучване техници добре да се започне с получаване на хистологични срези с дебелина 14-16 микрона и само постепенно, тъй като развитието на рязане технология, да се намали дебелината на филийки.
Правилно добави малки парчета на органи и тъкани при оптимална температура в стаята е добър режим нарязани и нарязани, обикновено попада на ножа в изправи състояние (прав ъгъл рязане). При рязане на големи блокове от твърд материал и секции често
обрат. Все пак, това може да бъде избегнато чрез залепване и повдигане на четката нарязани за рязане на ръба в процеса на рязане (фиг. 74). Трябва да се уверите, че кройката не е закован на острието, тъй като това е неговата адхезия и щети. Готов парче внимателно се отстранява с острие мокра четка (в посока от гърба на острието) и се пренася или в готова слайд или чаша топла (35-40 ° С) дестилирана вода. Водата предварително загрята да се предотврати появата на долната повърхност раздели на въздушни мехурчета (което може да бъде разтворено във вода), предотвратяване на еднакво свързване на секциите на стъкло. Раздели са били пуснати на вода се изисква (предметно стъкло) повърхност, е свързана с нож, който може да се определи характеристика гланц (горната страна винаги мат).

Фиг. 75.
Редът на серийни секции върху стъклото.
При рязане, е необходимо да се уверите, че космите на четката не подлежат на острието на ножа, тъй като това ще повреди на острието.
За редица проучвания, необходими за получаване на серийни секции. Важно е да не се обърка последователността на серийни секции спазват пързалка. За тази цел, лентата се нарязва със скалпел филии в отделни парчета около 3/4 от дължината на плъзгача и стека е винаги в определен ред заедно или в стъклото (фиг. 75). В различен брой парчета (2-4 до 25-30) може да бъде настанен в зависимост от размера на обекта и размера на плъзгача на една чаша.

Възможни грешки при производството на парафинови срези

За да се получи добро хистологични проби, трябва да бъде в състояние своевременно да идентифицират и елиминират причината, намалява качеството на съкращения.

1. Slice се разпада. Причини: 1) твърд парафин; 2) ниска температура на околната среда; 3) бавно охлаждане на отливката восък; 4) голям ъгъл на наклона на ножа. Решение: 1) perezalit материал по-мек парафин след предварително стопилка блок в термостат; 2) дишане на повърхността на блока (rewarming) преди всяко движение на ножа върху блок или коригира крушка; 3) промяна на ъгъла на наклона на ножа.
2. Изпълнен материал по време на рязане на падане от заобикалящата масата на парафин. Причини: 1) при прехвърляне на парче в калъп за леене е неговото охлаждане; 2) Напълнете произвежда студен парафин; 3) недостатъчно отстраняване на алкохол преди импрегниране. Решение: В първия и втория случаи трябва да се разтопи в термостат единица и да запълни отново, стриктно спазване на правилото за пълнене, в третия случай след предварително материал на топене се прехвърля в междинния среда (за отстраняване на алкохол), след това импрегнирани отново и се излива.
3. Равнината на разреза е неравномерно, материалът е слабо нарязани нарязани или не, ножът скокове над повърхността на блока. Причина - уплътняване на материала при окабеляването и фиксиране. Елиминиране не е възможно. Възможно е да се омекоти само няколко материал, ако повърхността на режещото острие преди всяко движение прилага към четка слой от горещо восък (като след това се охлажда) или диша на повърхността на блока.
4. Участъците се изви, се придържат към смачка острие повърхност. Причините: 1) малък ъгъл на наклон на ножа; 2) мек парафин; 3) високи температури на околната среда. Решение: 1) промяна на ъгъла на наклон; 2 и 3) perezalit материал в твърд парафин блок или охлажда чрез поставяне в хладилник преди рязане (също може да се постави върху повърхността на рязане парче лед).
5. Лепене, набръчкване или разкъсване на части, особено при рязане органи богати на костите, сухожилията и плътна съединителна тъкан може да се дължи на тяхната електрифициране. Решение: място на острието (при преминаване на границата) капка вода, и диша на блока с ножчета, част острие и триене на съседната част на ножа парче парафин.
6. Секциите бяха покрити с разкъсана или бразди. Причини: 1) стеснения на острието на ножа; 2) мръсно парафин (плътен нулата нарязани сламката и развалят острието); 3) слабо калцият се отнема материал. Решение: 1) и точката на изправяне или движение острие в носача на ножа; 2) perezalivke в чист парафин; 3) не могат да бъдат елиминирани.
7. Самолетът на среза не е еднакъв (белезникав в средната част). Причината - липсата на канализация. Решение: топене единица и носещ материал през междинен среда на абсолютен алкохол. След обезводняване се извършва чрез междинен носител се импрегнира и вграден.

Лепене.

За да парафинови блокчета могат да бъдат допълнително обработени, те трябва да бъде поставен върху предметно стъкло в изправи позиция. Съществуват няколко метода за залепване, резени, но най-широко адхезия протеин се използва глицерол.

Приготвяне на разтвора.

Към протеин от пресни кокоши яйца се добавя равно количество от обема на реагент клас глицерол и се разклаща добре (или пух). Полученият разтвор се филтрува през нагънат мокра филтърна хартия в чиста бутилка. За да се предотврати гниене на протеина към филтрата се прибавя на малки парчета от 2-3 (с зърно на пшеница) или тимол формалин (1: 100). В добре затворен съд разтворът се съхранява дълго време.

Фиг. 76.
Стречинг парафинови срези върху предметно стъкло, разположен на водата.

Получаване на слайдове да бъдат залепени трябва да се направи преди рязането на блока парафин в микротом, пускане на внимателно се почиства повърхността (cm. Стр.146) стъклена пръчка малка капка на протеинов разтвор с глицерол и втрива да се получи равномерен слой. Стриване може да се проведе пръст (тя предварително почистване с памук, напоен в етер) или фин чист лен кърпа. Подготовка пързалки, започват рязане парафин блок (вж. По-горе).
Има няколко начина за изправяне и лепене секции.

1. Ако срезовете бяха прехвърлени в разгъване в топла вода, след това с смазана протеин глицерин слайд подава в полегато положение при плаващи парчета ги тегли на стъклото с четка или дисекционен игла (фиг. 76) и ги свързват в правилната позиция. Срезовете трябва да бъдат разположени малко ексцентрично към единия край на плъзгача е по-свободни (когато такова устройство е по-голямо пространство за маркиране и изисква минимални количества реагенти в обработването на стъкло в чаши). След това излишната вода се отстранява (и леко накланяне на стъклото държи части от парафиново подгъв), поставени върху стъклени пластини и се поставя в инкубатор или сушилня (при 42-45 ° С) в продължение на 24 часа, и при което окончателно сушене се извършва и залепване на парчета. А може да се изсуши при стайна температура, по този начин предотвратяване на прах от секции, но по-добре да ги издържат на 36-48 часа.
2. Ако секции, прехвърлени от ножа директно върху намазана протеин с глицерин микроскопско стъкло, те могат да бъдат с различен пръчка.

Мокрият процес. На стъкло с помощта на пипета се прилага няколко капки преварена дестилирана вода и плаващи части са получени. Стъклото е след това внимателно затопля за лампа алкохол и да се постигне пълно изправяне секции. Трябва да се избегне прегряване, тъй като топенето на восъка причинява увреждане на среза.
В някои ниво на умение на нагряване е много лесно да се определи чрез прилагане на долната повърхност на стъклото на задната повърхност на четката (температурата на стъкло не трябва да предизвиква усещане за парене). За този метод за изправяне индустрия произвежда специални електрически уреди "Устройство за сушене и изправяне парафинови блокчета" (ТУ 64-1-38-73).
Много работна повърхност единица (250 x375 mm) позволява позициониране на масата 45 чаши едновременно. Устройството се захранва с променлив ток (напрежение 127 или 220). Маса поставен в непосредствена близост до микротом. Преди рязане на корицата е отстранена, включва устройството в мрежата. В протеин покрити стъклени слайди прилагат няколко капки дестилирана вода, поставени на масата. Изработен четката кройка се прехвърля към стъклото. След неговото изправяне на излишната вода се отстранява отново поставя върху стъклото на масата, за да изсъхне, след което стъклото се нарязва с изместване на масата и предпазва от прах преди боядисване.
Суха метод. Плосък (не е твърде мека) четка се притиска единия край на частта на плъзгача, след това внимателно се извършва около парче развиване и изправяне. След това изрежете четка притиска към стъклото, така че между долната повърхност на стъклото и не оставят въздушни мехурчета, и бързо се затопля над слаб пламък на духа лампа (да не прегрее!). В резултат на коагулация на протеин парче се залепва здраво към плъзгача и може директно да се подложи на по-нататъшна преработка без сушене.
Липса на сухо лепене, че тънки и нежни съкращения са лесно се повреждат и слабо се изправи, така че тя е приложима не винаги.
В тези случаи, когато наличието на нежелани belkovoglitserinovogo слой може да се придържаме секции с дестилирана вода или 30% алкохол. При този метод, слайдовете трябва да бъде внимателно обезмаслени, тъй като в противен случай водата неравномерно разпределен върху стъкло и срязване лошо поставени. метод на свързване е много прост: стъклото се прилага към водата (или 30% алкохол) и се поставя лъскава страна надолу секции; след това се нагрява, изправяне, вода се отстранява и се суши, както е описано по-горе.
Качеството на залепване филийки определят чрез третиране със страната на стъклото, които се съхраняват в наклонено положение. Ако срезовете се появяват матирано, адхезията е добър, ако има части, блестящи като огледало, и след това нарязани между стъкления слой и въздухът е не е настъпило тази точка на свързване. Тези секции са допълнително обработени с стъклото да се плъзга лесно. Обикновено въздушен слой се случва, когато недостатъчна чистота на плъзгача или прекалено ниска температура на пещта. Предотвратяване приплъзването на съкращения може да се постигне чрез tselloidinovoy защита.
Забележка. Стой филии в топла вода трябва да бъдат намалени до минимум, защото в противен случай може да се наблюдава подуване на съединителната тъкан (особено при заключване на течности, съдържащи трихлороцетна киселина и пикринова киселина), разтваряне и извличане на определени вещества в тъкан състав.