Антиглобулинов Coombs тест - методи, стандарти за изпълнение

Антиглобулинов Coombs тест - методи, стандарти за изпълнение

Принцип антиглобулинов тест на Coombs. молекула Antieritrotsitnye антитяло и частичен вид на комплемент (С), разположен върху повърхността на еритроцити vyyavimy - директен тест - тяхното аглутинация в контакт с животински серум, съдържащ антитела към човешки антиглобулиновия (антиглобулинов серум). Свободните серумни антитела открити непълна - индиректен тест - тяхното фиксиране на смес от нормален еритроцити група 0, всички от които принадлежат на известни антигени Rh система допълнително agglyutiniruemye изложени антиглобулинов серум.

Материали, Coombs антиглобулиновия тестовите реагенти. 10/100 мл тръби; Градуирани пипети 1, 2 мл; Пастьор пипети; стативи; предмет неполиран стъкло; 8,5 ‰ разтвор на натриев хлорид; еритроцитите. Червените кръвни клетки на пациента, както и принадлежащи към групата 0 се получават от прясно съставен кръв антикоагулиращ вещество (EDTA).

Червените кръвни клетки са група далеч 0 по такъв начин, че те идват от частни лица в нормален и съдържа всички антигени на системата Rh. Те може да се съхранява до 7 дни в автоложна плазма при температура + 4 ° С При липса на група 0 еритроцитите известен антигенен възможно мозайка да се използва смес от еритроцити група 0, Rh-положителен Rh-отрицателни еритроцити.

серум на пациента трябва да е прясно изготвен.

Антиглобулинов серум се произвежда от Института за тях. Р I. Кантакузин наличен в лиофилизирана форма в ампули, съдържащи 1 мл. След разтваряне на серума се съхранява при -20 ° С

тест Техника антиглобулинов Coombs.
а) тест Direct Coombs. еритроцити пациент промива 3 пъти с разтвор на 8,5 ‰ NaCl.
Няколко пързалки, пуснати на големите капки антиглобулиновия серумни разреждания, а на следващия - за една малка капка на червените кръвни клетки на пациента, седимент; Mix капки ъгъл стъкло. Смесената материал оставен на масата в продължение на 5 минути. след това изследвани за наличие на слепва. В случай на положителен резултат, за да се определи максималната аглутинатен тигъра.

б) Непряко тест на Coombs. еритроцити група 0 rezuspolozhitelnye и Rh-отрицателни измиване 3 пъти с 8,5 ‰ разтвор на натриев хлорид и изложени на пациент скорост на 2 капки еритроцити 8-10 капки серум, след това, за 60 мин серум. инкубира при 37 ° С След това отново се промива три пъти с червените кръвни клетки и да ги отрази антиглобулинов серум, в инструкциите за директен тест на Coombs.

Когато става въпрос за сенсибилизация антитяло студена активна група 0 еритроцитите държи 60 минути. при + 4 ° С

Забележка. 1) Не провежда тест директно на Coombs на еритроцити съхраняват един или повече дни при + 4 ° С или стайна температура, тъй като резултатите могат да бъдат неверни положителни резултати поради фиксиране на разположение в нормален серум неправителствена, активно антитяло студено. 2) В случаи на тежки hyperproteinemia 4-5 пъти, за да се измие еритроцитите и да се провери отсъствието на серумни протеини в последния промивната течност чрез sulfosalitsilovoy киселина.

Възможна остатък от 2 мг / мл IgG пакетирани червени кръвни клетки в утайката могат да неутрализира антиглобулиновия серума. Coombs тест може да се проведе като се използва моноспецифични анти-IgG, -IgM, -IgA С3-С4 серуми и за изясняване на формата, на повърхността на еритроцити glubolin, например, тези, които страдат от автоимунни хемолитична анемия.