техники за отглеждане анаероби

Изисквания към средата.

Всяка хранителна среда трябва да отговаря на следните TRE-менти: съдържа цялата необходима материал за размножаване на микроорганизми в лесно смилаеми форма; имат оптимална влажност, вискозитет, рН и да бъде изотоничен количка-Moznosti прозрачен. Всяка културна среда стерилизирани по определен начин в зависимост от неговия състав.

5. сеене техники на бактерии на течни и твърди хранителни среди. Условия за култивиране на бактерии. Апаратура за култивиране на микроорганизми.

А универсален инструмент за производство на култури е etsya бактериална линия. Освен нея, за посев хладно оръжие при промяна на специални бактериална игла, както и за култури на блюда на Петри - изработени от стъкло или метална шпатула. За култури течни материали, заедно с една линия се използва и пастообразна Rovsky мерителна пипета.

Чрез субкултивиране тръба бактериална култура, взето в лявата и дясната притиснал памук щепсел IV и V пръстите, отстранява това, провеждане над пламъка на горелката. Задръжте Дру-ГИМИ пръстите на една и съща ръка контур, спечелвайки го ма Therians на семена, а след това затворете запушалката на флакона. След тръба с наклонен агар вземане линия с семенен материал, това намаляване до кондензат в долния Ча-STI среда и зигзаг движение разпределя мате риал на конусния повърхността на агара. Сваляне на линия, изгори край на тръбата и го затваря с предпазител. Loop стерилизирани в пламъка на горелка и се слага в статив. Епруветки с култури nadg кредитирани с сочи дата посев и природата на семената мат-риал на (броя проучване или името на културата).

Култури "трева" произвеждат шпатула на среда хранителен агар в петриево блюдо. За тази цел отваряне на лявата покритие домашен любимец-Leu или отпипетира инокулум се прилага върху повърхността на хранителен агар. след Лопатка извършва чрез пламъкът изгори-ки, охлажда се от вътрешната страна на капака и се стрива материал по повърхността на средата. След инкубиране, засяване появява еднакво непрекъснат растеж на бактерии.

техники за отглеждане анаероби.

За култивирането на анаеробни бактерии е необходимо да се намали редокси потенциал на средата, COS-в анаеробни условия, Е. съдържание на средата и неговата среда ниска кислород т.е... Това се постига с помощта на физически, химически и биологични методи логически metodov.Fizicheskie. Въз основа на култивиране на микроорганизмите в безвъздушна среда, което се постига чрез: 1) посев в среда, съдържаща редуктори и лесно окисляващи вещества и 2) дълбочината на засяване микроорганизми в плътна среда пи tatelnyh 3) механично отстраняване на въздуха от кораби, в ко-toryh отглеждат анаеробни микроорганизми;

4) подмяна на въздуха в съдовете на всеки indiffe наемната-газ.

Като редуктори, използвайки най-често от парчета (около 0,5 г) от животински или растителни тъкани (черен дроб, мозъка, бъбреците, далака, кръв, картофи, памук). За да се намали-zhanie съдържа кислород в културална среда, преди сеитба се кипи в продължение на 10-15 минути, след това бързо се охлажда и Zali-vayut най малко количество стерилна ваза-Linova масло. Височината на слоя на масло в тръбата 1, виж толкова лесно окисляващи вещества, използвани glyu-коза, лактоза и натриев формиат.

дълбочината на засяване микроорганизми в плътни носители про-безпроблемен Метод съгласно Vignal - Veyona който се състои в механично защитна култури срещу анаероби въздух кислород. Вземете една стъклена тръбичка с дължина 30 см и диаметър 6,3 метра мм. Единият край на тръбата се изтегля в ка-капилярна във форма на пипета на Пастьор и в другия край направи свиване. Останалата част от широкия край на тръбата се вкарва в тампон от памук. Епруветките с разтопен и се охлажда до 50 ° С Хранителен агар плочи посяват с изпитваното вещество. След nasasyvayut агар посяват в стерилни епруветки Vignal - Veyona. Капилярна-ия край на тръбата се запечатва в епруветка горелка пламък и се поставя в инкубатор. Това създава благоприятни условия за растежа на най-строги анаероби. Vyde-среда за отделна тръба колония назъбена napilni-ком, асептично, при ниво на колония, ето труд и улавяне колония със стерилна линия и се прехвърля в епруветка с хранителна среда за отглеждане на дълго-Sheha и изучаване в чист въздух vide.Udalenie продукция от механично изпомпване на първите специални устройства - anaerosta-ране, в които се поставят чашата с засяването на анаеробни бактерии. Подвижно Анаеробна представлява tolstosten-ти метален цилиндър с матово стъкло покриви добре кортеж (с гумена облицовка), снабден с манометър вакуум и превключвател кран. След поставяне на инокулираните пластини или тръби на въздушния анаеробни се отстранява чрез вакуум въздух nasosa.Zamenu безразличен газ (азот, в едър, аргон, въглероден двуокис) може да се извърши по същия анаеробни чрез изместване от методите за газ ballona.Himicheskie. Въз основа на абсорбция на въздух кисел вид в запечатан съд (anaero членове, ексикатор) вещества като пирогалол или Na2S204 натриев хидросулфит.

Биологични методи. Въз основа на споделена-ти на капацитет анаероби строг аероби. За тази агар от чаша замразени диаметър изрязва със стерилен скалпел лента агар-солна wideness на около 1 см. Две превръща в един агар полу-диск. От едната страна на агарова плоча схемата vayut-аероб, като се използват често S. Aureus или Serratia marcescens. От другата страна на схемата Ана erob. Ръбовете на плочите са запечатани с пластелин или излива разтопено парафин и се поставят в инкубатор. В присъствието на подходящи условия в чашата ще razmno-сбирка аероби. В края на краищата на кислород в лесен чашата на пространството ще се използва от тях да започне растежа на анаеробни бактерии (3-4 дни). За да се намали проветриво фута пространство в средата на чаша се излива евентуално дебел.

Комбинирани методи. Въз основа на комбинация от фи Phe-, химически и биологични методи за създаване на анаеробно.

6. Културни свойства бактерии. Характерните колонии. Пигменти бактерии.

Културни свойства бактерии

хранителните нужди на условията за растеж и характера на развитието на бактерии върху бактериологично. среди. Хранителните изисквания включват източници на въглерод, азот и растежни фактори, способността на бактериите да расте на определени хранителни среди, условия за растеж -Ph, Е, O2 плътност концентрация, осмотичното налягане на средата, температурата на растеж; в растежа характер - темп на растеж (бързо, бавно), наблюдателен RY на течни, твърди и полутвърди медии, промени, притежавани до възможно в средносрочен или отделни нейни компоненти по време на растежа на микроби. Информация за KS се използват при избора и култивиране методи за идентификация на избрания к-RY.

. К. m са големи или малки, гладка или набръчкана, лъскава или матова, с краищата гладка, lobed или друг сивкаво или в образуването на пигменти, оцветени в различни нюанси на жълто, оранжево, червено или други цветове ..; колонии от гъбички са покрити с прахообразно покритие. Colony характеристики на форма, цвят и др., Обикновено включени в описанието на вида микроорганизъм.

7. растежа и размножаването на бактериите. Фаза на размножаване на бактериите в затворена среда (партида култура). Непрекъснато култивиране.

Жизнената дейност на бактериите се характеризира с растеж - VOR Мин структурни и функционални компоненти на самата клетка и увеличаване на бактериалната клетка, както и размножават-niem - самостоятелно размножаване, което води до увеличаване на ко-lichestva бактериални клетки в популацията.

Бактериите се размножават чрез двоичен делене на половина, по-рядко от начинаещи. Actinomycetes, като гъби, са времето умножи спори. Актиномицети бактерии са разклонени, размножават чрез фрагментиране на влакнести клетки. Грам-положителни бактерии са разделени от врастване синтез-ал прегради, разделящи вътрешността на клетката и грам - от стеснения, в резултат на фигури gantelevid-ционни образуване, от които се образуват две подобни клетки.

Cell разделяне се предхожда от бактериален вид репликация chro-MOS на semiconservative (верига двойноверижна ДНК се отваря и всяка нишка е завършен с комплементарна аудио-Tew), което води до удвояване на ДНК молекулите на бактериална ядро ​​- Нуклеоидът.

ДНК репликация се среща в три етапа: иницииране, Елон gatsiya или размножаване верига и прекратяване.

Размножаване на бактерии в течна хранителна среда. Бактерия, засети по-специално без да се променя обема на хранителната среда, възпроизвеждане, консумират хранителни вещества, което води до по-нататъшно изчерпване на хранителната среда и предварително съкращения са бактериалния растеж. Култивиране на бактерии в B-TEM наречен партида култивиране и култура - периодично. Ако условията на култивиране се поддържат чрез непрекъснато подаване на прясна среда и изтичане на същия обем от културалната течност, култивирани, наличието на нарича непрекъсната култура и - непрекъснато.

Когато отглеждане на бактерии в течна хранителна среда, се наблюдава близо до дъното, или дифузна повърхност (под формата на филм) растеж култура. Растеж партида култура от бактерии, отгледани в течна хранителна среда, е разделена на няколко етапа или периоди: 1. закъснение фаза 2. логаритмична фаза на растеж; 3. стационарна фаза на растеж, или максималната kontsentratsiibaktery; 4. фаза на смърт на бактериите.

Закъснение фаза - между сеитба и начало на възпроизвеждане на бактериите. Фаза логаритмична (експоненциална) период на растеж е в интензивност разделяне бактерии. След това, на стационарната фаза на растеж настъпва. при което количество zhiz-неспособни клетки остава непроменена, като макси ниво вено Завършване на процеса на растеж на бактерии смърт фаза. характеризиращ отмиране бактерии при условия на изчерпване на хранителна среда, източник и се образува в метаболизма на бактерията. Възпроизвеждането на бактерии върху твърда среда. Бактериите растящи върху твърда хранителна среда, за да образуват колонии се изолира целия закръглени с гладка или грапава край S (S- и R-форми), различни консистенции и CEE-та-зависима бактерии пигмент.

Много пигменти разполагат със две антимикробно, antibiotikopodobnym действие.

Повече отглеждане perspektivnonepreryvnoe. Същността му се състои в това, че във ферментатора се поддържа постоянна условия на околната среда, в резултат на което микроорганизмите остават в определена физиологично състояние. Fed свежа хранителна среда и излишък среда се отстранява от метаболитни продукти, фазата на експоненциален растеж се поддържа. Ако използвате за ферментация, а след това говори за хомогенна-непрекъснат процес за отглеждане на производителя. Ако се използва батерията е дву-непрекъснат процес, тъй като във всеки ферментатор, който е свързан с батерията, да се поддържа постоянно състояние. В непрекъснато култивиране на микроорганизми офлайн промяна на етапите на развитие на културата. В такива процеси, културалната среда от скоростта на система поток и събиране културалната среда трябва да се регулира до клетъчна концентрация остава постоянна. При стерилни условия, непрекъснат метод гарантира запазването на културата във физиологично активно състояние за дълго време.

8. Методи за изолиране и идентифициране на чиста култура от аеробни бактерии.

Методът на серийни разреждания. предложен от Луи Пастьор, той е бил един от първите, който е бил използван за механично разделяне на микроорганизми. Тя се състои в извършване на последователни серийни разреждания материал, който съдържа микроби в стерилен течен хранителна среда. Този метод е доста трудоемък и несъвършена работа, тъй като тя не позволява да се контролира броя на микробните клетки, които попадат в тръбите при разреждания.

Drygalski метод е по-напреднал метод, който е широко разпространен в ежедневната практика на микробиология. Първо, на повърхността на средата, в петриево блюдо с пипета или тест линия материал се прилага. С помощта на метална шпатула или чаша тя старателно втрива в околната среда. Купата по време на сеитба запази prividkritoyu и леко се разклаща, за да се разпредели равномерно материала. Не стерилизация шпатула, задръжте ги взе на материала в друга чашка на Петри, с необходимостта - в третия. Едва след това dezinfikuyuchy шпатула се потапя в разтвор или пържени в пламъка на горелката. На повърхността на средата в първата чашата се наблюдава обикновено сливащ се растеж на бактерии във втория - гъста растеж, а третият - растежа на изолирани колонии.