Получаване на хистологични препарати

Хистологично подготовка на някаква форма трябва да отговаря sleduyuschimtrebovaniyam:

· Поддържане на целия експлоатационен живот на държавните структури;

· Да бъде достатъчно тънък прозрачен и да се проучи под микроскоп при преминаваща светлина;

· Бъди разлика от това, което е, да се проучи структурата под микроскоп трябва да бъдат ясно дефинирани;

· Подготовка за светлинна микроскопия трябва да се поддържат в продължение на дълъг период от време и да се използват за повторно разглеждане.

Тези изисквания са постигнати при получаването на състава.

Разпределяне sleduyuschieetapy получаване хистологичен препарат.

· Capture материал (части от тъкан или орган), за да се подготвят състава. Така се взема предвид следните точки:

· Ограда материал трябва да се извърши възможно най-рано след смъртта или клането на животното и, ако е възможно, от дневната обекта (биопсия) за по-добре запазена структура на клетка, тъкан или орган;

· Ограда парчета трябва да се направи с остър инструмент, така че да не се травматизират тъканта;

· Дебелина парче не трябва да превишава 5 mm, към разтвора на фиксиране може да проникне във вътрешността на парче;

· Задължително произведени парче маркировка (посочете име на тялото на животното, или номер фамилия човека, дата на вземане на проби, и така нататък).

· Определяне на необходимо да се спре метаболизъм и запазване на структури от гниене материал. Фиксирането се осъществява чрез потапяне често парчета при определяне течност, която може да бъде прости алкохоли и формалдехид и комплекс разтвор Carnoy. Tsinker и други заключване. Фиксаторът причинява денатуриране на белтъците и по този начин спира метаболитни процеси и съхранява структура в държавата на неговия живот. Фиксирането може да се постигне също така чрез замразяване (охлаждане в поток от СО2. Течен азот и други). Продължителност фиксиране избран емпирично за всяка тъкан или орган.

· Пълнене парчета в запечатване среда (парафин, целоидин, смола) или се замразява за по-късно производство на тънки парчета.

· Получаване на секции на специални инструменти (микротомни или ultramicrotome) със специални ножове. Разрязани за светлинна микроскопия са залепени върху стъклени плочки, както и за електронна микроскопия - монтирана на специална мрежа.

· Цветът на резени или контрастен (за електронна микроскопия). Преди отстранени живопис секции запечатване среда (депарафиниращ). се постига контрастен цвят на структурите. Багрила са разделени на основни, киселинни и неутрални. са най-широко използваните основни багрила (обикновено хематоксилин) и кисел (еозин). Често се използват багрила.

· Пробуждане секции (ксилен, толуен), при сключването на смолата (балсам, полистирен), затваряне на капак стъкло.

След тези последователни лекарствени лечения могат да бъдат изследвани под светлинен микроскоп.

За целите на електронна микроскопия в етапите на подготовка на наркотици, са някои от функциите, но общите принципи са едни и същи. Основната разлика се състои в това, че хистологичен препарат за светлинна микроскопия може да се съхранява за постоянно и се използва повторно. Разрязани за електронна микроскопия се използва само веднъж. В този случай, първо снимат обектите на интерес на лекарството, както и изследване на структури се провежда вече в електрона.

Течен последователност от тъкани (кръв, костен мозък и т.н.) са направени под формата препарати намазка върху предметно стъкло, което също е фиксиран, оцветени, и след това изследвани.

От нечупливи паренхимните органи (черен дроб, бъбреци и т.н.) са направени промени на формата на тялото препарати отпечатък на. след празнина фрактура или орган на орган местоположение вина прилага слайд стъкло, на която са залепени някои свободни клетки. След това получаване се фиксира, оцветени и изследвани.

Накрая, някои от органи (мезентериална тъкан, PIA) или на насипни продукти съединителната тъкан са направени от разтягане на фолиото или смачкване между двете стъкла, и с последващо фиксиране, оцветяване и се налива в смола.

· Светлинна микроскопия (резолюция 0.2 микрона), най-често срещаният тип на микроскопия;

· Ултравиолетови микроскопия (резолюция 0.1 микрона);

· Fluorescent (флуоресцеин) микроскопия за определяне на химикали в тези структури;

· Фазово-контрастен микроскоп за изследване на структури в проби неоцветени тъкан;

· Поляризиращ микроскопия за изследване, главно влакнести структури;

· Тъмно поле микроскопия за изучаване на живите същества;

· Микроскопия в падащата светлина за изучаване на дебели обекти;

· Електронна микроскопия (резолюция 0.1-0.7 пМ), две неговите варианти полупрозрачен (предаване) електронна микроскопия и сканираща микроскопия или растер картографиране дава подструктури повърхност.

Хистохимични и цитохимични методи позволява да се определи състава на химични вещества и тяхното количество, дори в изследваните структури. Методът се основава на провеждане химични реакции с използваните реагенти и химическите вещества в субстрата за да се образува реакционен продукт (контраст или флуоресценция), който след това се определя от светлина или флуоресцентна микроскопия.

диференциално центрофугиране метод позволява да се проучи отделните органели или дори фрагменти. изолирана от клетки. За тази парче изследвани органи се стрива, изсипва се нормален физиологичен разтвор и след това се диспергира в центрофуга с различни скорости (2-150 ти.) До получаване на фракции от интерес след това се изследват чрез различни методи.

метод интерферометрията за определяне на масата на сухи вещества в живи или неподвижни обекти.

Immunomorfologichesky методи дава използвайки предварително имунни реакции, извършени на базата на антиген-антитяло взаимодействие, за да се определи субпопулация на лимфоцити. определи степента на чужди клетки. проведе хистологично типизиране на тъкани и органи (определи хистосъвместимост) за трансплантация на органи.

Метод на клетъчна култура (ин витро, ин виво) - култивиране на клетки ин витро или в специални капсули в организъм и последващо изследване на живите клетки под микроскоп.

Единиците, използвани в хистология

За измерване на структурите в светлинен микроскоп се използва главно микрометра: 1 М е 0.001 mm; в електрон микроскопски нанометра използват 1 нм е 0,001 микрона.