Методи за изследване на ензимната активност на бактерии - studopediya

Ензими - са биологични катализатори (повишена честота на химични реакции). Химически, те са протеини.

Подобно на други организми, ензими, бактериални ензими се разделят на 6 групи в зависимост от реакциите на тип катализирана:

- Клас 1 - оксидоредуктаза - катализира редокс реакции;

- Клас 2 - трансфераза - катализира реакцията на прехвърляне на различни групи от съединения от единия към другия;

- Клас 3 - хидролаза - катализирана реакция разцепване вещество в прости съединения с участието на вода;

- Степен 4 - лиаза - катализирана реакция на елиминиране (или свързване) на различни химични групи субстрати не-хидролитични средства;

- Степен 5 - изомераза - катализира реакцията на изомеризация, т.е. преобразуване на органични вещества в техните изомери;

- Клас 6 - лигаза - катализира синтез реакционните комплексни съединения от прости съединения.

Ензими Бактериите са разделени на екзогенен и endofermenty.

Endofermenty катализирани процеси в клетката. Exoenzymes разпределена от бактериите в околната среда. Тя ензими: а) храносмилателни ензими, които разграждат сложните хранителни вещества до по-прости вещества; б) защитни ензими като пеницилиназа предпазва клетъчната стена чрез действието на антибиотика пеницилин; в) ензими агресия - вирулентни фактори на патогенни бактерии;

- хиалуронидазни - разцепва хиалуронова киселина;

- деоксирибонуклеаза - разцепва клетъчна ДНК;

- fibrinolizin - смила колагена;

- plazmokoagulaza - ролки кръвна плазма;

- невраминидаза - разцепва неураминова киселина;

- letsitovitellaza - разделя лецитин.

Състав бактериален ензим се определя от геном и следователно характерен за някои видове, т.е. е специфичен характер. Поради това изследването на ензимни или биохимични свойства са много важни за диференциация (разлика) и идентификация (определяне на тип) бактерии. Най-често се определи ензим клас хидролази и оксидоредуктази.

Сред оксиредуктаза ензими за микробни идентификационни използвайки ензими като каталаза и оксидаза цитохром (СО).

Каталаза - ензим, който разгражда на Н 2О 2 за получаване на водород и кислород. Каталаза може да открие мехурчета от кислород, които стават видни след смесване на микробните клетки с 1% разтвор на Н 2О 2 ром.

Цитохром открива както следва: реагент хартия, навлажнена и прилага ежедневно микроорганизъм култура. Оказва синьо оцветяване.

Сред хидролазите са ензими изследвани ензими, които разцепват въглехидрати (захари) или и ензими, които разцепват протеини (или протеини). Способността на бактериите да разцепи въглехидрати наречени saccharolytic свойства и способността за разцепване протеини - протеолитични свойства.

Тези свойства се идентифицират чрез разцепване на крайните продукти след засяването определена среда. Когато захари гниене определяне на образуването на киселини (млечна, оцетна, мравчена) и газове (СО2 и Н2) и разграждането на протеини - образуването на алкален, Н2 S, NH3.

В определени saccharolytic, протеолитични или други ензимни свойства на бактерии, наречени бактерии биохимични свойства.

Проучване saccharolytic свойства.

За да се определят свойствата използвани saccharolytic среда: средно плътен Ендо и Ливайн Ploskireva и takzhezhidkie Хис и полутечна среда.

Ендо среда, Левин Ploskireva съдържа лактоза и в определен индикатор.

Тези среди позволяват да се направи разграничение между патогенни бактерии от Е. коли - Е. коли. Е.коли е в състояние да отцепи лактоза, защото на галактозидаза ензим. След разцепване на лактозата образува кисели храни, които променят цвета на индикатора. Следователно, Е. Coli форми в среди оцветени колонии върху Ендо среда - червени колонии с метален блясък; Левин в сряда - тъмно сини колонии; В сряда Ploskireva - червени колонии. Salmonella и Shigella имат галактозидаза ензим, не се разцепва лактоза, и цвета на средата не се променя. Следователно Salmonella и Shigella формира Ендо агар, Левин и Ploskireva безцветни колонии.

Така, в една и съща среда, има различен модел на растежа на различни видове бактерии, като Те имат различни ензими. Това дава възможност да се разграничат един вид от друг.

Хис среда, съдържаща лактоза, глюкоза, малтоза, захароза и манитол, както и различни показатели. Ако бактерии усвоява въглехидрат да образуват киселинни продукти наблюдава промяна на цвета в средата, и ако в киселинен газ и - наблюдаване на външния вид на продукта газ.

Хис течна среда, съставена от вода пептон, 1% въглехидрати и индикатор Andred (киселина фуксин, обезцветява с алкален). Средата се понижава поплавък, който е изпълнен с стерилизиране средата. Оригиналният цвят на средата - сламено жълт. След разцепване на въглехидрати цвят среда е светло розово (червено). Ако се образува газ, тя се натрупва в поплавъка. Ако въглехидратите не са разбити, цветът на средата не се променя.

Свистене полутвърда среда, съставена от 0.2-0.5% месо-пептон агар (IPA), 1% въглехидрати и индикатор BP (вода-синьо багрило и rozolovaya киселина). Оригиналния цвят на средата - розово-сиво. След разцепване на въглехидрати среда цвят става синя и, ако се образува газ, има прекъсвания в средата.

Определен вид бактерия ферментира, не всички, а само някои въглехидрати, така че цветът се променя в някои тръби, а в другата - не се променя, а се оказва, "серия от колоритен" .Всеки вид бактерии се характеризира със своята "пъстър следващия."

Свойствата на проучване протеолитични.

Протеолитични свойства на бактериите изследвани:

а) способността да се втечни желатин. различни бактериални видове имат различни форми втечняване на желатина; S. Aureus - във форма на фуния; Бак. antracis - под формата на обърната дърво; Vibrio холерният - под формата на нокти и т.н. Желатинови втечнен бактерии с ензим - колагеназа;

б) най-крайните продукти от разграждането на протеина след засяване на месо-пептон бульон (ВСН). Може да бъде следните крайни продукти: индол, Н2 S, NH3.

За да се открият тези продукти се използват с показатели на хартия. Показателят за индола - оксалова киселина (лист хартия е оцветен в розово). За Н2 S - оловен ацетат (черно). За NH3 - лакмусова хартия (синьо).

Нататъшно проучване свойства, като например намаляване на нитрати в нитрити, Кларк butandiolovoe ферментация среда и други разграждане на нишесте.